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需氧芽孢总数

指在有氧条件下，经80℃加热处理10min，能存活并且于36℃下培养48h在MPC琼脂平板上形成可计数的菌落总数。

1、称取培养基4.9g溶解于含有200ml去离子水的锥形瓶中，121℃15min高温高压灭菌，备用。

2、挑取适量的枯草芽孢杆菌于10ml无菌生理盐水中，制成菌悬液。

3、立即将试管放入80±1℃的水浴中，使试管内液面至少低于水面4cm。

4、加热处理10±1min，在对照管中放一支温度计测定温度。试管内样液的升温时间不应超过5min。

5、将加热处理后的试管取出立即放到20℃以下的流水中冷却。

6、将冷却后的菌悬液进行梯度稀释。

7、选择适宜的2-3个梯度，吸取1ml稀释液至无菌空平皿中，每个稀释度接种两个平皿，立即倾注12-15ml冷却至45℃左右MPC琼脂培养基，小心转动平皿使稀释液与培养基混合均匀，水平放置使混合物凝固。（从热处理结束到稀释液与培养基混合所用时间不得超过15min。）

8、接种样液的同时，用1ml稀释液，做空白试验。

9、待琼脂凝固后，堆叠平皿，将其倒置在培养箱中，36±1℃培养48±2h。

10、保留含有10-150个菌落的培养皿进行菌落计数。