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样品制备

固体和半固体样品以无菌操作称取25 g，液体样品应先将其充分摇匀后以无菌吸管吸取25 mL，置于装有225 mL稀释液的均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min~2 min，制成1:10的样品匀液。

注：1.冷冻样品：可先使其在2℃~5℃条件下解冻，时间不超过18 h，也可在温度不超过45℃的条件下解冻，时间不超过15 min。

  2.稀释液在试验前应在36℃±1℃条件下充分预热15 min~30 min；

  3.经特殊技术（如包埋技术）处理的含乳酸菌食品样品应在相应技术/工艺要求下进行有效前处理。

  4.样品的全部制备过程均应遵循无菌操作程序。

样品稀释

1.用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于装有9 mL稀释液的无菌试管中，振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。

2.另取1 mL无菌吸管或微量移液器吸头，按上述操作顺序，做10倍递增样品匀液，每递增稀释一次，即换用1次l mL灭菌吸管或吸头。

注：1.注意吸管或微量移液器吸头尖端不要触及稀释液

  2.经特殊技术（如包埋技术）处理的含乳酸菌食品应按照相应技术/工艺要求进行稀释。

样品计数

本标准中，主要涉及了3种乳酸菌，分别为乳杆菌属、双歧杆菌属和嗜热链球菌。由于3种乳酸菌的培养条件和特征各有不同，要检验出样品中乳酸菌的总数，就需要根据菌种的不同选择使用合适的培养基，对结果进行计数。

以乳杆菌计数为例

  1.根据待检样品活菌总数的估计，选择2个~3个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取1 mL样品匀液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。

  2.稀释液移入平皿后，将冷却至48℃~50℃的MRS琼脂培养基倾注入平皿15 mL~20 mL，转动平皿使混合均匀。

  3.培养基凝固后倒置于36℃±1℃厌氧培养，根据乳杆菌生长特性，一般选择培养48 h，若菌落无生长或生长较小可选择培养至72 h。

  注：从样品稀释到平板倾注要求在15 min内完成。