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阴沟肠杆菌的分离与鉴定


阴沟肠杆菌的分离与鉴定奶粉中阴沟肠杆菌的污染一直受到人们的关注,本视频以《SN/T 2552.7-2010 乳与乳制品卫生微生物学检验方法 第7部分:阴沟肠杆菌检验》为依据,详细讲述一下阴沟肠杆菌的分离与鉴定操作。
1.分离:轻轻混匀增菌液,用下列方法进行平板接种:
(1)直接涂布法:每份增菌液取0.2 mL加到2个阴沟肠杆菌分离琼脂平板(ECIA),每个平板0.1 mL,用无菌玻璃涂布棒涂布(如果预计奶粉中含有大量的细菌,应使用灭菌的EE肉汤将增菌液稀释10-4~10-6后涂布)。
(2)直接划线法:每份增菌液用3 mm接种环(10 μL)分别接种2个阴沟肠杆菌分离琼脂平板,三区法或四区法划线,以得到单个菌落。将平板倒置于36℃±1℃,培养18 h~22 h。
观察平板上阴沟肠杆菌的典型形态,在阴沟肠杆菌分离琼脂平板上:黄色菌落,圆形,凸起,直径2 mm~3 mm。
2.初步鉴定:从阴沟肠杆菌分离琼脂平板上挑取5个可疑菌落,分别进行初步生化试验:赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶、精氨酸双水解酶试验。
3.对赖氨酸脱羧酶阴性、鸟氨酸脱羧酶阳性、精氨酸双水解酶阳性的可疑菌落,进行革兰氏染色,氧化酶试验。
4.对革兰氏染色阴性,氧化酶试验阴性的可疑菌落进行KCN生长试验、蔗糖、卫矛醇、棉子糖、D-山梨醇、黄色素试验。
5.若出现以上生化结果KCN生长试验+、蔗糖+、卫矛醇(-)、棉子糖+、D-山梨醇+、黄色素试验-,即可报告检出阴沟肠杆菌。

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