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副溶血性弧菌检验(二)生化试验


副溶血性弧菌检验(二)生化试验初步鉴定
氧化酶试验:取约50 μL蒸馏水将氧化酶试纸浸湿,挑选纯培养的单个菌落进行氧化酶试验,用细玻璃棒或一次性接种环(针)挑取单个菌落,涂在试纸上。在30s内变为蓝色或蓝紫色为阳性,不变色为阴性。副溶血性弧菌为氧化酶阳性。
涂片镜检:将可疑菌落涂片,进行革兰氏染色,镜检观察形态。副溶血性弧菌为革兰氏阴性,呈 棒状、弧状、卵圆状等多形态,无芽胞,有鞭毛。
挑取纯培养的单个可疑菌落,转种3%氯化钠三糖铁琼脂斜面并穿刺底层,36 ℃±1 ℃培养 24 h,观察结果。副溶血性弧菌在3%氯化钠三糖铁琼脂中的反应为底层变黄不变黑,无气泡,斜面颜色不变或红色加深,有动力(动力补充试验:使用3%氯化钠V-P半固体进行动力试验,使用接种针挑取菌苔穿刺接种于3%氯化钠V-P半固体培养基中,结果为沿穿刺线生长且扩散生长,表明有鞭毛有动力)
嗜盐性试验:挑取纯培养的单个可疑菌落,分别接种 0%、6%、8%和 10%不同氯化钠浓度的胰胨水,36 ℃±1 ℃培养 24 h,观察液体混浊情况。副溶血性弧菌在无氯化钠和 10%氯化钠的胰胨水中不生长或微弱生长,在6%氯化钠和 8%氯化钠的胰胨水中生长旺盛
确定鉴定
取纯培养物制备成菌悬液,分别接种100 μL菌悬液至含3%氯化钠的甘露醇试验培养基(阳性为黄色,阴性为蓝色或蓝绿色)、赖氨酸脱羧酶试验培养基(注意:同时做氨基酸脱羧酶对照试验,均加灭菌石蜡覆盖培养基液面;本管变紫色或紫红色,对照管变黄色,为阳性;本管与对照管均变黄色为阴性。)、MR-VP培养基[培养结束需滴加VP试剂(甲液6滴,乙液2滴),混匀后继续放置,4h之内变红则为阳性,棕黄色或不变色为阴性]。以上所有生化试验均在36 ℃±1 ℃培养箱中培养 24 h~48 h 后观察结果;
取3%氯化钠三糖铁琼脂隔夜培养物制备成菌悬液,接种100 μL菌悬液至含3%氯化钠ONPG生化管中进行 ONPG 试验(阳性为淡黄或黄色,阴性无颜色)。
结果与报告
根据检出的可疑菌落生化性状,报告 25 g(mL)样品中检出副溶血性弧菌。如果进行定量检测,根据证实为副溶血性弧菌阳性的试管管数,查最可能(MPN)检索表,报告每 g(mL)副溶血性弧菌的MPN值。副溶血性弧菌菌落生化性状和与其他弧菌的鉴别情况分别见表2和表3。

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