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一、样品的稀释

  1.固体和半固体样品：称取25 g样品，加入225 mL无菌稀释液（注：无菌稀释液可使用蒸馏水、生理盐水、磷酸盐缓冲液），充分振摇（注：还可使用拍击式均质器拍打1 min~2 min），制成1:10的样品匀液。

  2.液体样品：以无菌吸管吸取25 mL样品至盛有225 mL无菌稀释液的适宜容器内或无菌均质袋内，为使样品更为均匀，可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠，混匀操作同固体样品一致。

  3-4.取1 mL 1:10样品匀液注入含有9 mL无菌稀释液的试管中，另换一支1 mL无菌吸管反复吹吸，或在旋涡混合器上混匀，此液为1:100的样品匀液。按此操作可继续制备10倍递增稀释浓度的样品匀液。每递增稀释一次，换用1支1 mL无菌吸管。

  5.根据对样品污染状况的估计，选择2-3个适宜稀释度的样品匀液（注：液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释的同时，每个稀释度分别吸取1 mL样品匀液于2个无菌平皿中。同时分别取1 mL无菌稀释液加入2个无菌平皿作空白对照。

  6.及时将冷却至46℃的马铃薯葡萄糖琼脂或孟加拉红琼脂（注：培养基可放置46℃±1℃恒温水浴锅中保温）倾注平皿，每个平皿20~25 mL，转动平皿使其混合均匀。置水平台面待培养基完全凝固。

二、培养

  琼脂凝固后，正置平板，置28℃±1℃培养箱中培养，观察并记录培养至第5天的结果。 补充：展示黑曲霉、酵母菌分别在马铃薯葡萄糖琼脂、孟加拉红琼脂平板上的菌落状态。本次试验以固体样品接种于孟加拉红琼脂平板为例计数。

三、菌落计数

  肉眼观察，必要时可用放大镜或低倍镜，记录稀释倍数和相应的霉菌和酵母菌落数。以菌落形成单位（CFU）表示。 选取菌落数在10 CFU-150 CFU的平板，根据菌落形态分别计数霉菌和酵母。霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为菌落蔓延。

四、结果与报告

  1.计算同一稀释度的两个平板菌落数的平均值，以孟加拉红琼脂结果为例，1:10平均菌数为24，再将平均值乘以相应稀释倍数，为24*10=240。注：满足以下其它条件的按具体说明计数。

  2.报告 称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告，报告或分别报告霉菌和/或酵母数。本次试验报告样品含黑曲霉菌数为240 CFU/g。