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O157检验方法的条件优化



录入时间:2014-4-25 11:43:20 来源:银河澳门官网入口

1.增菌培养基:国际上采用的为mEC+n、mTSB+n、 EHEC Enrichment Broth (EEB=TSB)+CCV、BPW-VCC。通过比较,mEC与mTSB差异不大,且为我国“污染物监测网”和“全国肠出血性大肠杆菌O157:H7感染性腹泻”检测中普遍使用。(2005年,国家食源性疾病监测网  食品中病原菌检验)

2.增菌培养温度:国际方法中有3个培养温度:NMKL为41.5±0.5℃  、 USDA/BAM为35±2℃,其余为37℃。实验结果表明,在41.5±0.5℃时,温度作为一个选择性因子,能够抑制杂菌丛的生长,但同时O157也部分地受到抑制。在36±1℃ 时,O157的相对量较多。

3.分离培养基:目前国际上采用的培养基有:SMAC、CT-SMAC、Rainbow agar等,本实验分别使用了SMAC、CT-SMAC、CHROMagar、改良CHROMagar琼脂平板,结果表明:改良CHROMagar > CHROMagar > CT-SMAC > SMAC。

4.平板分离方法的选用:

  (1)常规方法:FDA、CCFRA方法均使用2块平板,涂布:取0.1ml或适当稀释后的增菌液0.1ml进行,划线取满环。通过实验表明,选择2块平板, CT-SMAC和改良CHROMagar ,取增菌液0.1ml先涂布一半,再划线一半,可以减少操作误差,得到较好的分离效果。

(2)磁珠方法(IMS):国际上使用磁珠量为20 μl ,选择2块平板, CT-SMAC和改良CHROMagar ,取磁珠悬液各50 μl,先涂布一半,再划线一半,可以减少操作误差,同样得到较好的分离效果。

5. 血清学:使用O157、H7因子血清鉴别。但哈夫尼亚、变形、异常沙门菌、柠檬酸杆菌等与O157可能有交叉反应,需要用生化进一步鉴定。

6.生化项目:一般使用Indole、MUG等作为筛选试验,API20E、VITEK GNI或GNI+作为鉴定试验。本法使用TSI、MUG作为筛选,MUG可筛除E.coli、宋内氏、柠檬酸杆菌、肠杆菌、克雷伯氏菌、哈夫尼亚菌、粘质沙雷氏菌、耶耳森氏菌等。TSI可筛除沙门菌、志贺氏菌、变形、部分普罗菲登氏菌、摩根氏菌等。 API20E、VITEK GNI或GNI+作为鉴定试验。

 


 

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