1 主题内容与适用范围
本标准规定了蜡样芽胞杆菌的检验方法。
本标准适用于食品和食物中毒样品中蜡样芽胞杆菌的检验。
2 引用标准
GB 4789.2 食品卫生微生物学检验 菌落总数测定
GB 4789.28 食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂
3 设备和材料
3．1 温箱：36±1℃。
3．2 普能冰箱。
3．3 显微镜。
3．4 恒温水浴 46±1℃。
3．5 天平。
3．6 电炉。
3．7 吸管：1 mL，10 mL。
3．8 载玻片。
3．9 均质器或乳钵。
3．10 L 型涂布棒。
3．11 灭菌刀，剪，镊子。
3．12 三角瓶：容量 500 mL。
4 培养基和试剂
4．1 肉浸液肉汤培养基：GB 4789.28 中 4.1。
4．2 酪蛋白琼脂培养基：GB 4789.28 中 4.65。
4．3 动力-硝酸盐培养基：GB 4789.28 中 4.72。
4．4 缓冲葡萄糖蛋白胨水：GB 4789.28 中 3.4。
4．5 血琼脂培养基：GB 4789.28 中 4.6。
4．6 3%过氧化氢溶液。
4．7 甲萘胺-乙酸溶液。
4．8 对氨基苯碘酸-乙酸溶液。
4．9 革兰氏染色液：GB 4789.28 中 2.2。
4．10 甘露醇卵黄多粘菌素（MYP）琼脂培养基：GB 4789.28 中 4.64。
4．11 0.5%碱性复红染色液：GB 4789.28 中 2.8。
4．12 木糖-明胶培养基：GB 4789.28 中 4.66。
5 操作步骤
蜡样芽胞杆检验程序下：
6 操作步骤
6．1 菌数测定
以无菌操作将检样 25 g（mL） （按 GB 4789.2 测定），用灭菌生理盐水或磷
酸盐缓冲液做成 10
-1
～10
-5
的稀释液。取各稀释液 0.1 mL，接种在两个选择性培
养基——甘露醇卵黄多粘菌素（MYP）琼脂培养基上，用L 形棒涂布于整个表面，
置 36±1℃温箱培养基 12～20 h 后选取适当菌落数的平板进行计数，蜡样芽胞
杆菌在此培养基上的菌落为粉红色（表示不发酵甘露醇）周围有粉红色的晕（表
示产生卵磷脂酶） 。计算后，从中挑取 5 个此种菌落做证实试验。根据证实为蜡
样芽胞杆菌的菌落数计算出该平板上的菌落数， 然后乘其稀释倍数， 即得每克 （或
毫升）样品中含蜡样芽胞杆菌数，例如 MYP 平板的可疑菌落数为 25 个，取 5 个
鉴定，证实为4 个，乘上稀释倍数（如10
4
） ，再乘上1 g（或mL）检样数（取的
是 0.1 mL 样）则为：
25×4/5×10
4
×10=2×10^6
6．2 分离培养
取检样或稀释液划线分离培养于选择性培养基（MYP）上，置37℃培养12～
20 h，挑取可疑的蜡样芽胞杆菌菌落（见6.1）接种于肉汤和营养琼脂做成纯培
养，然后做证实试验。
6．3 证实试验
6．3．1 形态观察
本菌为革兰氏阳性大杆菌，宽度在 1μm或1μm以上，芽胞呈卵圆形，不突
出菌体，多位于菌体中央或稍偏于一端。
6．3．2 培养特性
本菌在肉汤中生长混浊，常微有菌膜或壁环，振摇易乳化；在普通琼脂平板
上生成的菌落不透明、表面粗糙、似毛玻璃状或融蜡状，边缘不齐。
6．3．3 生化性状及生化分型
6．3．3．1 生化性状
本菌有动力；能产生卵磷脂酶和酪蛋白酶；过氧化氢酶试验阳性；溶血；不
发酵甘露醇和木糖； 常能液化明胶和使硝酸盐还原； 在厌氧条件下能发酵葡萄糖。
6．3．3．2 生化分型
蜡样芽胞杆菌可根据对柠檬酸盐利用、硝酸盐还原、淀粉水解、V-P反应、
明胶液化性状的试验，将该菌分成不同的型别，见表 1。
本菌在生化性状上与苏云菌芽胞杆菌极为相似， 但后者可籍细胞内产生蛋白
质毒素结晶加以鉴别。其检查方法如下：取营养琼脂上纯培养物少许，加少量蒸
馏水涂于玻片上，待自然干燥后用弱火焰固定，加甲醇于玻片上，半分钟后倾去
甲醇，置火焰上干燥，然后滴加 0.5%碱性复红液，并用酒精灯加热至微见蒸气
维持 1.5 min，移去酒精灯，将玻片放置半分钟，倾去染液，置洁净自来水充分
漂洗，晾干，镜检，在油浸镜下检查有无游离芽胞和深染的似菱形的红色结晶小
体（如未形成游离芽胞，培养物应放室温再保存 1～2 d 后再检查） ，如有即为苏
云金芽胞杆菌，蜡样芽胞杆菌检查为阴性。
附加说明：
本标准由卫生部卫生监督司提出。
本标准由卫生部食品卫生监督检验所负责起草。
本标准主要起草人白竟玉。
本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。
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