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常见产毒霉菌的鉴定



录入时间:2008-9-22 14:17:10 来源:青岛海博

1  主题内容与适用范围 
本标准规定了食品中常见的产毒霉菌的鉴定方法。 
本标准适用于曲霉属、青霉属、镰刀菌属及其他菌属的产毒菌种的鉴定。 
2  引用标准 
    GB 4789.28  食品卫生微生物学检验  染色法、培养基和试剂 
3  设备和材料 
3.1  显微镜。 
3.2  目镜测微计。 
3.3  物镜测微计。 
3.4  温箱。 
3.5  冰箱。 
3.6  无菌接种罩。 
3.7  放大镜。 
3.8  酒精灯。 
3.9  接种钩针。 
3.10  分离针。 
3.11  滴瓶。 
3.12  载物玻片。 
3.13  盖玻片:18 mm×18 mm。 
3.14  小刀。 
4  培养基和试剂 
4.1  乳酸-苯酚液:按 GB 4789.28 中 3.24 规定。 
4.2  察氏培养基:按 GB 4789.28 中 4.77 规定。 
4.3  马铃薯-葡萄糖琼脂培养基:按 GB 4789.28 中 4.79 规定。 
4.4  马铃薯琼脂培养基:按 GB 4789.28 中 4.80 规定。 
4.5  玉米粉琼脂培养基:按 GB 4789.28 中 4.82 规定。 
5  操作步骤 
5.1  菌落的观察:为了培养完整的巨大菌落以供观察记录,可将纯培养物点植
于平板上。方法是:将平板倒转,向上接种一点或三点,每菌接种两个平板,倒
置于 25~28℃温箱中进行培养。当刚长出小菌落时,取出一个平皿,以无菌操
作,用小刀将菌落连同培养基切下1  cm×2  cm 的小块,置菌落一侧,继续培养,
于 5~14 d 进行观察。此法代替小培养法,可直接观察子实体着生状态。 
5.2  斜面观察:将霉菌纯培养物划线接种(曲霉、青霉)或点种(链刀菌或其
他菌)于斜面,培养5~14 d,观察菌落形态,同时还可以将菌种管置显微镜下
用低倍镜直接观察孢子的形态和排列。 
5.3  制片:取载玻片加乳酸-苯酚液一滴,用接种针钩取一小块霉菌培养物,
置乳酸-苯酚液中,用两支分离针将培养物撕开成小块,切忌涂沫,以免破坏霉
菌结构。然后加盖玻片,如有气泡,可在酒精灯上加热排除。制片时最好是在接
种罩内操作,以防孢子飞扬。 
5.4  镜检:观察霉菌的菌丝和孢子的形态和特征、孢子的排列等,幷做详细记
录。 
5. 5  报告:根据菌落形态及镜检结果,参照以下各种霉菌的形态描述及检索表,
确定菌种名称。 
6  各种霉菌的形态特征 
6.1  曲霉属(Aspergillus) 
本属的产毒霉菌主要包括黄曲霉、寄生曲霉、杂色曲霉、构巢曲霉和棕曲霉。
这些霉菌的代谢产物为黄曲霉毒素、杂色曲霉素和棕曲霉毒素。 
曲霉属的颜色多样,而且比较稳定。营养菌丝体由具横隔的分枝菌丝构成,
无色或有明亮的颜色,一部分埋伏型,一部分气生型。分生孢子梗大都无横隔,
光滑、粗糙或有麻点。梗的项端膨大形成棍棒形、椭圆形、半球形或球形的项囊,
在项囊上生出一层或二层小梗,双层时下面一层为梗基,每个梗基上再着生两个
或几个小梗。从每个小梗的项端相继生出一串分生孢子。由项囊、小梗以及分生
孢子链构成一个头状体的结构,称为分生孢子头。分生孢子头有各种不同颜色和
形状,如球形、放射形、棍棒形或直柱形等。曲霉属只少数种形成有性阶段,产
生封闭式的闭囊壳。某些种产生菌核或菌核结构。少数种可产生不同形状的壳细
胞。 
6.1.1  黄曲霉(A.flavus) 
属于黄曲霉群。在察氏琼脂培养基上菌落生长较快,10~14 d直径3~4 或
4~7 cm,最初带黄色,然后变为黄绿色,老后颜色变暗,平坦或有放射状沟纹,
反面无色或带褐色。在低倍显微镜下观察可见分生孢子头疏松放射状,继变为疏
松柱状。分生孢子梗多从基质生出,长度一般小于 1 mm。有些菌丝产生带褐色
的菌核。制片镜检观察可见分生孢子梗极粗糙,直径10~20μm。顶囊烧瓶形或
近球形,直径10~65μm,一般多为 25~45μm。全部顶囊着生小梗,小梗单层、
双层或单、双层同时生在一个顶囊上;梗基6~10μm4~5.5μm。小梗6.5~10μ
m×3~5μm。分生孢子球形、近球形或稍作洋梨形,3~6 μm,粗糙(见图 1)。 
黄曲霉产生典曲霉毒素,该毒素能引起动物急性中毒死亡,如长期食用含微
量黄曲霉毒素的食物,能引起肝癌。 
6.1.2  寄考曲霉(A.parasiticus) 
亦属于黄曲霉群,8~10 d 菌落 2.5~4 cm,平坦或带放射状沟纹,幼时带
黄色,老后呈暗绿色,反面奶油色至淡褐色。低倍显微镜下观察见分生孢子头疏
松放射状,直径 400~500 μm,分生孢子梗长短不一,一般为200~1000 μm,
制片镜检观察,见分生孢子梗光滑或粗糙,近顶囊处宽 10~12 μm,顶囊近球
形或烧瓶形或杵状,直径20~35 μm,小梗单层,7~9 μm×3~4 μm,排列紧
密。分生孢子球形,极粗糙,具小刺,直径3.5~5.5 μm,未报道过产生菌核。  
寄生曲霉的菌株都能产生黄曲霉毒素。 
6.1.3  杂色曲霉(A.versicolor) 
    属于杂色曲霉群。在察氏琼脂培养基上菌落生长局限,14 d直径2~3 cm,
绒状、絮状或两者同时存在。颜色变化相当广泛,不同菌系可能局部淡绿、灰绿、
浅黄甚至粉红色;反面近于无色至黄橙色或玫瑰色。有的菌落有无色至紫红色的
液滴。 分生孢子头疏松放射状, 大小为 100~125 μm。 分生孢子梗长度可达500~
700 μm,宽 12~16 μm,光滑,无色或略带黄色。顶囊半椭圆形至半球形,上
半部或四分之三部位上着生小梗。小梗双层,梗基 5.5~8 μm×3  μm,小梗5~
7.5 μm×2~2.5 μm,分生孢子球形,粗糙,直径2.5~3 μm或稍大。有些菌
系产生球形的壳细胞(见图 2)。 
    杂色曲霉产生杂色曲霉素,该毒素引起肝和肾的损害,幷能引起肝癌。 
6.1.4  构巢曲霉(A.nidulans) 
属于构巢曲霉群。菌落生长较快,14 d 直径 5~6 cm,绒状,绿色,有的菌
系由于产生较多的闭囊壳而显现黄褐色,反面紫红色。分生孢子头短柱形,40~
80 μm×25~40 μm。分生孢子梗极短,常弯曲,一般 75~100 μm,近顶囊处
直径 3.5~5 μm,褐色,壁光滑。顶囊半球形,直径8~10 μm。小梗双层,梗
基 5~6 μm×2~3 μm,小梗5~6 μm×2~2.5 μm。分生孢子球形,粗糙,直
径 3~3.5 μm。闭囊壳球形,暗紫红色,直径 135~150 μm。子囊孢子双凸镜
形,紫红色,约 5 μm×4 μm,有两个鶏冠状突起。闭囊壳外面包围着一层壳细
胞,淡黄色,球形,壁厚,直径约 25 μm(见图 3)。 
构巢曲霉产生杂色曲霉素。 
6.1.5  赭曲霉(A.ochraceus) 
属于赭曲霉群。在察氏琼脂培养基上菌落生长稍局限,10~14 d 直径 3~4 
cm,褐色或浅黄色,基质中菌丝无色或具有不同程度的黄色或紫色,反面逞黄褐
色或绿褐色。分生孢子头幼时球形,老后分裂成 2~3 个柱状分叉。分生孢子梗
长达 1~1.5 mm,直径10~14 μm,带黄色,极粗糙,有明显的麻点。顶囊球形,
直径 30~50 μm 或更大。小梗双层,自顶囊全部表面密集着生。分生孢子球形
至近球形,直径 2.5~3 μm 或更大,常略粗糙。有些菌系产生较多的菌核,初
期为白色,老后淡紫色,球形、卵形至柱形,直径达 1 mm(见图 4)
赭曲霉产生赭曲霉毒素,该毒素是一种强的肾脏毒和肝脏毒。 
6.2  青霉属(Penicillium) 
本属产毒霉菌,主要包括黄绿青霉、桔青霉、圆弧青霉、展开青霉、纯绿青
霉、红青霉、产紫青霉、冰岛青霉和皱褶青霉等。这些霉菌的代谢产物为黄绿青
霉素、枯青霉素、圆弧偶氮酸、展青霉素、红青霉素、黄天精、环氯素和皱褶青
霉素。 
青霉属的营养菌丝体呈无色、淡色或鲜明的颜色,具横隔,或为埋伏型或部
分埋伏型部分气生型。气生菌丝密毡状、松絮状或部分结成菌丝索。分生孢子梗
由坦伏型或气生型菌丝生出,稍垂直于该菌丝(除个别种外,不象曲霉那样生有
足细胞) ,单独直立或作某种程度的集合乃至密集为一定的菌丝束,具横隔,光
滑或粗糙。其先端生有扫帚状的分枝轮,称为帚状枝。帚状枝是由单轮或两次到
多次分枝系统构成, 对称或不对称, 最后一级分枝即产生孢子的细胞,称为小梗。
着生小梗的细胞叫梗基, 支持梗基的细胞称为副枝。小梗用断离法产生分生孢子,
形成不分枝的链,分生孢子呈球形、椭圆形或短柱形,光滑或粗糙,大部分生长
时呈蓝绿色,有时呈无色或呈别种淡色,但决不呈污黑色。少数种产生闭囊壳,
或结构疏松柔软,较快地形成子囊和子囊孢子,或质地坚硬如菌核状由中央向外
缓慢地成熟。还有少数菌种产生菌核。 
6.2.1  黄绿青霉(P.citreoviride),异名:毒青霉(P.toxicarum) 
属单轮青霉组,斜卧青霉系。菌落生长局限,10~12 d直径2~3 cm,表面
皱褶,有的中央凸起或凹陷,淡黄灰色,仅微具绿色,表面绒状或稍现絮状,营
养菌丝细,带黄色。渗出液很少或没有,有时呈现柠檬黄色,略带霉味。反面及
培养基呈现亮黄色。分生孢子梗自紧贴于基质表面的菌丝生出,一般50~100 μ
m×1.6~2.2 μm,壁光滑。帚状枝大部为单轮,偶尔有作一、二次分枝者。分
生孢子链约略平行或稍散光滑或近于光滑,成链时具明显的孢隔(见图 5)。 
黄绿青霉的代谢产物为黄绿青霉素,该毒素是一种很强的神经毒。 
6.2.2  桔青霉(P.citrinum) 
属于不对称青霉组,绒状青霉亚组,桔青霉系。菌落生长局限,10~14 d
直径 2~2.5 cm,有放射状沟纹,大多数菌系为绒状,另一些则呈现絮状,艾绿
色。反面黄色至橙色,培养基颜色相仿或带粉红色。渗出液呈淡黄色。低倍显微
镜下分生孢子链为明确的分散柱状。分生孢子梗大多自基质生出,也有自菌落中
央气生菌丝生出者,一般 50~200 μm×2.2~3 μm,壁光滑,一般不分枝。帚
状枝由 3~4 个轮生而略散开的梗基构成,12~20 μm×2.2~3 μm,每个梗基
上簇生 6~10 个略密集而平行的小梗,8~11 μm×2~2.8 μm。分生孢子呈球
形或近球形,直径 2.2~3.2 μm,光滑或近于光滑(见图 6)。 
桔青霉产生桔青霉素,该毒素是一种强的肾脏毒。 
6.2.3  圆弧青霉(P.cyclopium) 
属于不对称青霉组, 束状青霉亚组。 菌落生长较快, 12~14 d 直径4.5~5 cm,
略带放射状皱纹,老后或显现环纹,暗蓝绿色,在生长期有宽 1~2 mm之白色边
缘,质地绒状或粉粒状,但在较幼区域为显著束状。渗出液无或较多,色淡。反
面无色或初期带黄色,继变为橙褐色。帚状权不对称,紧密,常具三层分枝,约
50~60 um,上生纠缠的分生孢子链。分生孢子梗大多200~400 um×3~3.5 um,
典型地粗糙,但也有一些菌系近于光滑。副枝 15~30 um×2.5~3.5 um。梗基
10~15 um×2.5~3.3 um。小梗4~8个轮生,7~10 um×2.2~2.8 um。分生孢
子大多近球形,3~4 um,光滑或略现粗糙(见图 7)。 
圆弧青霉的代谢产物为圆弧偶氮酸,该毒素是一种强的肾脏毒。 
6.2.4  岛青霉(P.islandicum) 
属于双轮对称青霉组,绳状青霉系。在察氏琼脂培养基上菌落生长局限,致
密丛状,呈橙色、红色及暗绿色的混合体。反面浊橙色至红色,变至浊褐色。低
倍显微镜下分生孢子链纠缠链状,分生孢子梗短,长 50~75 μm,由气生菌丝
或菌丝索上生出, 壁光滑, 帚状枝典型对称双轮生, 稍短, 小梗有些骤然变尖7~
9 μm×2 μm。分生孢子椭圆形,光滑,3~3.5 μm×2.5~3 μm(见图 8)。 
岛青霉产生黄天精和环氯素,该毒素均为肝脏毒,能引起动物的肝损害,幷
能引起肝癌。 .......
   
   

 

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