建议用下列方法恢复培养冷冻干燥保藏的菌种。

－、安瓶管开封

1．用浸过70％酒精的脱脂棉擦净安瓿管。

2．用火焰将安瓿管顶端加热。

3．滴无菌水至加热的安瓿管顶端使玻璃开裂。

4．用挫刀或镊子敲下已开裂的安瓿管的顶端。

二、菌株恢复培养

1．用无菌吸管，吸取0.3～0.5ml适宜的液体培养基，滴人安瓿管内，轻轻振荡，使冻于菌体溶解呈悬浮状。

2．取0.1～0.2ml菌体悬浮液，移植于适宜的琼脂斜面／平板培养基上，剩余的菌液，注入适宜的液体培养基内，然后在建议的温度下培养。

3．若未能活化，或活化后有疑问时，请于收到菌种1个月内，通知保藏中心，经查证无误后，即免费补寄。

三、注意事项

1．菌种活化前，请将安瓿管保存在6一10℃的环境下。

2．厌氧菌的培养，如无特别说明，自开封至接种完成，均需以无氧气体充填，以保持厌氧状态。

3．某些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，需连续两次继代培养才能正常生长，此时请将步骤二(2)重复一次。

液氮超低温保藏程序：

1、容器的选择：使用带螺旋盖的2ml塑料安培瓶。

2、检查安培瓶是否渗漏：用0.05%的亚甲基蓝水溶液在4℃浸泡30-45分钟，冲洗干净，弃去含有蓝色染料的安培瓶，其余的安培瓶备用。

3、打印标签(激光打印)。

4、容器的灭菌：先用蒸馏水漂洗干净安培瓶，再用蒸馏水在灭菌锅中121℃浸泡灭菌15分钟，干燥并将打印好的标签放入安培瓶中，略拧紧螺旋盖，再行121℃灭菌30分钟。

5、保藏菌菌龄：处于最大生长量阶段或对数生长期后期。

6、保护剂：选用5-10%的甘油或二甲基亚砜作保护剂。

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