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细菌的单染技术



录入时间:2011-12-5 16:02:24 来源:微生物实验

简单染色通常只用一种染色剂,使细菌整个细胞染上颜色。但看不清结构。所以只便于检查细菌的形态、大小和排列方式等。
【实验目的】
1、掌握单染色的操作技术
2、观察细菌的基本形态
【实验原理】
单染色即用单纯的种染料进行染色,多数采用美蓝、结晶紫或石碳酸复红等碱性染料。此法仅能显示细胞的外部形态,而不能辨别其内部结构。染色前必须将细胞固定,其目的是杀死细菌,并使它粘附在载玻片上。此外,还可以增加菌体对染料的亲和力。常用的有加热和化学固定两种方法。无论用哪种方法都应尽量使细菌维持原有的形态,防止细胞膨胀或收缩。
【实验材料、药品及器具】
1、菌种 大肠杆菌(Escherichia coli)
枯草芽孢杆菌(Bacillus Subtilis)
2、染色液 石炭酸品红染色或结晶紫染色液(Stining Solutions)
3、无菌水
4、洗瓶装蒸馏水
5、洗净的载玻片(Slicle)5片
6、显微镜、香柏油、接种环、酒精灯、擦镜纸、吸水纸、二甲苯
【实验步骤】
1、涂片:取一片干净无油载玻片,在其中央滴一滴无菌水,然后用接种环以无菌操作方法取少许培养好的大肠杆菌,放在载玻片的水滴中涂匀,注意菌量不宜过多,否则,不易看清单个菌体。
2、固定:将涂好的玻片在空气中风干或火焰上通过3~4 次,使水份蒸发,此时细菌菌体紧贴在玻片上。
3、染色:用石炭酸品红或结晶紫染色剂30~60S,然后用洗瓶轻轻冲洗染色剂(注意不要直接冲洗染色部位),直至无多余的染液,晾干或用吸水纸从旁吸干或用微火烘干。
4、用同样方法将枯草芽孢杆菌制作一张涂片。
5、镜检:首先在低倍镜下找到物像,然后在涂膜中央滴一滴香柏油,换成油浸镜观察两个菌种的形态和排列。
6、去除油镜上的香柏油:先用干净的擦镜纸擦2-3 次,再换另一张擦镜纸蘸取少许二甲苯以除去残留的香柏油,最后用擦镜纸擦干。擦镜头时应顺着镜头直径方向擦,不要沿着圆周方向擦。
【实验结果】
1、绘制观察到大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的形态图,并注明放大倍数。
2、用文字描述两菌株的细胞形态。
【思考题】
1、涂片在染色前为什么要先进行固定?固定时应注意什么问题?
2、制片为什么要完全干燥后才能用油镜观察?
3、制片时应注意哪些事项?为什么?

 

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