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植物病毒抗血清效价的测定



录入时间:2011-11-1 14:39:13 来源:生物在线

一、目的
 
    抗血清的效价,也称为滴定度,是抗血清中抗体含量的相应近似值,是抗血清质量的主要指标之一,由能和最少的病毒发生可见反应的血清的最大稀释度来表示,稀释度越大则效价越高。
    测定抗血清效价有多种方法,常用于各种沉淀反应法,如试管沉淀反应、微量沉淀反应、免疫扩散反应;也有人用酶联反应等其他方法。本实验学习最常用的微量沉淀反应法测定抗血清的效价。
 
二、实验步骤和用具
 
1. 未经免疫的正常血清和抗血清
2. 提纯病毒悬浮液
3. 0.85% NaCl( 生理盐水 ), 0.01M磷酸盐缓冲液加 0.85 %NaCl ( PBS缓冲液 ) 。
4. 塑料培养皿、特种铅笔、注射器和皮下注射针头、吸管、微量离心管。
 
三、实验步骤
 
1. 在塑料培皿内用特种铅笔划成约 7 ×7mm 的方格
2. 在微量离心管中用生理盐水配成血清系列稀释液1ml,1,1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,…,1/1024
3. 用PBS配制病毒系列稀释液1ml,1,…,1 ∶128
4. 用注射器按顺序每格各放一滴血清和抗原,作好标记。注意:先放血清,后放病毒;浓度由低到高;保持每滴大小一致。加样后缓慢晃动培养皿使混匀。并设置正常血清作对照;样品可以按照附图排列。
5. 从培皿边缘慢慢倒入石腊油,使均匀覆盖。
6.  室温下或25oC下放置2小时后观察记载,24小时后作第二次观察记载。可在解剖镜下进行,用暗视野或将背景调暗观察。
7. 观察沉淀生成时,目测五级标准分别记载为 +++,++,+,±,-,以出现+的最大血清稀释度为血清效价。
 
注意:长条形病毒形成不定形云雾状沉淀;球形病毒形成颗粒状絮凝沉淀。

 

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