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显色培养基在单核细胞增生李斯特菌快速检测中的应用研究(2)



录入时间:2011-9-29 16:45:25 来源:维普

 

2.3 人工污染样品检测结果

纯菌污染样品检测结果:用单增李斯特菌10-3-10-8浓度菌液污染牛奶和猪肉后,按国标检测结果表明,所有稀释度增菌后在4种培养基上都能检出,其中在HKListeriaCHROMagar Listeia上呈现蓝色带晕环菌落,在OXAMMA上分别呈现黑色和蓝白色菌落,HKListeria、CHROMagar Listeria、OXA、MMA可以达到相同的检测结果。

单增李斯特菌和非李斯特菌混合污染样品检测结果:将单增李斯特菌和非李斯特菌10-310-8 混合菌液污染牛奶和猪肉后,国标检测结果表明,这4种培养基上都可以检测出单增李斯特菌,说明非李斯特菌存在时,HKListeria、CHROMagarListeia、OXA、MMA仍可以达到相同的效果,非李斯特菌对单增李斯特菌没有太大影响。单增李斯特菌、英诺克和非李斯特菌混合污染样品检测结果:当单增李斯特菌和英诺克按100 cfu:10 cfu混合污染牛奶和猪肉后,按国标法4种培养基都可检出单增李斯特菌,在HKListeriaCHROMagar Listeia上呈现蓝色带晕环菌落,英诺克呈现蓝色无晕环菌落,其他杂菌基本不长,在OXAMMA上单增李斯特菌和英诺克都分别呈现黑色和蓝白色菌落,二者无法区分;当单增李斯特菌和英诺克按10 cfu:10 cfu10 cfu:100 cfu比例混合时,HKListeriaCHROMagar Listeia上只有英诺克生长,单增李斯特菌和其他非李斯特菌均未生长,表明英诺克存在时对单增李斯特菌检测有一定影响。

2.4 实际样品检测

实际样品检验结果如表4。62份实际样品共检出李斯特菌15份,其中猪肉检出英诺克4株,格式李斯特2株;鸡肉检出单增李斯特菌1株,英诺克3株,格式李斯特2株;鱼肉检出英诺克2株;牛肉检出英诺克1株;其他样本未检出。阳性样品在4种培养基上检测结果符合率为100 。HKListeria、CHROMagar Listeia的检测效果优于OXA、MMA,能够区分单增李斯特菌和其他李斯特菌。表4 实际样品中李斯特菌检测结果

样品

HKListeria

CHROMagarListeria

OXA

MMA

猪肉(19份)

631.6%

631.6%

631.6%

631.6%

牛肉(5份)

120%

120%

120%

120%

鸡肉(17份)

635%

635%

635%

635%

鱼肉(10份)

220%

220%

220%

220%

熟食(3份)

0

0

0

0

蔬菜(4份)

0

0

0

0

蛋糕(4份)

0

0

0

0

括号中表示同一类样品中阳性样本的检出率

3 讨论

利用显色培养基鉴定细菌是一种新的快速检测方法,通过在培养基中加入细菌特异性酶的显色底物,直接观察菌落颜色就可对菌种作出鉴定 。在HKListeriaCHROMagarListeria显色培养基上,单增李斯特菌呈现蓝色带晕环的菌落,其他李斯特菌呈现蓝色不带晕环的菌落。金黄色葡萄球菌、蜡样芽胞杆菌、粪链球菌等杂菌或被抑制或没有晕环,菌落形态与单增李斯特菌有明显区别。

在本试验中,对单增李斯特纯菌液、单增李斯特和非李斯特菌混合菌液的检测结果表明,HKListeria、CHROMagar Listeria上单增李斯特菌的检出率与对照平板TSAYE没有明显差异,说明HKListeriaCHROMagar Listeria对单增李斯特菌基本没有抑制作用;人工污染样品和实际样品检测结果表明,HKListeriaCHROMagar Listeia具有更高的检测效率,可根据菌落颜色和形态直接对单增李斯特菌作出鉴定,而OXA、MMA上生长的菌落还需进一步生化鉴定才能确定结果。因此,HKListeriaCHROMagar Listeria具有较高灵敏度、特异性和选择性,是非常有价值的分离平板,可为食品微生物的快速检测提供有力帮助。

另外,试验中还发现,当样品中英诺克数量高于单增李斯特菌时,单增李斯特菌不能够有效地检出。Restaino L等人也曾有类似的报道,英诺克数量高时容易造成单增李斯特菌检测结果的假阴性。分析可能是英诺克在增菌过程中生长过快,数量过多,对单增李斯特菌产生了一定的竞争或抑制作用。因此,在使用显色培养基检测单增李斯特菌时,要特别注意英诺克的干扰问题。

作者:张淑红 ,吴清平,张菊梅

作者单位:广东环凯微生物科技有限公司,广州 510070;2.广东省微生物研究所 广东省菌种保藏与应用重点实验室,广州 510070

 

[参考文献]

[1]郁庆福,蔡宏道,何晓青,等.现代卫生微生物学[M].北京:人民卫生出版社,1995116117

[2]陈太基,袁宝君.单核增生性李斯特菌检测方法的应用验证[J].江苏预防医学,2002,13(4):6l62

[3]吴清平,周艳红,蔡芷荷.卫生微生物特异性显色培养基的研究与应用[J].中国卫生检验杂志,2005,15(1):124126

[4]Restaino L,Frampton EW,Schabert GIsolation and detection of Listeria monocytogenes using fluormogenic substrates for phosphafidylinositol specific phospholipase C[J]Food Prot,1999,62(3):244248

[5]Manail MFluorogenic and chromogenic enzyme substrates in culture media and identification tests[J]Int J Food Microbiol,1996,31(3):4558

 

 

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