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病毒学实验技术(4)



录入时间:2011-8-10 8:45:17 来源:百度

 

常用溶液的配制

(一)胰蛋白酶溶液  以汉克斯液配制,其浓度因胰蛋白酶牌号而定。一般说来,Difco牌用0.27%,E·Merk牌用0.75%,新疆生化所产品用0.5%,其它牌号要经试验确定。按量将胰蛋白酶加入汉克斯氏液后,置3720分钟使其完全溶解,滤器除菌(不能加温,更不能高压)无菌检查合格后置-20保存,用前加适量的3.5%或1.4 NaHCO3使其pH7.67.8。此液供消化细胞用。

(二)汉克斯(Hank’s)氏液,亦称亨克氏液;

原液甲一:

NaCl                     160g    

MgSO4·7H2O             2g

KC1                      8g      

MgC12·6H2O              2g

按顺序加入到800m1双馏水中,一物溶解后再加另一物。

原液甲二: CaC12  2.8g溶于 l00 ml双馏水中。

以上两液混合,加双馏水至1000 ml,加2ml氯仿防腐,保存于5。

原液乙一:

N aH2PO4·12H2O          3.04g 

KH2PO4                   1.20g

葡萄糖                    20g

按顺序加入到800ml双蒸馏水中。

原液乙二:0.4%酚红液100 ml0.4%酚红液是将0.4g酚红置乳钵中,边研磨边徐徐滴加入0.1NNaOH 11.28ml, 酚红应完全溶解,置于100ml量杯中,最后加双蒸馏水达100 ml)。

将酚红液与葡萄糖等混合液混合,加双蒸馏水至1000ml)加入2ml氯仿防腐,保存于5。

按下方配成汉克斯氏液,原液甲1份、原液乙1份、双馏水18份,910分钟灭菌,此液在5下可保存1个月。

用前以1.4 NaHCO3910分钟灭菌过),无菌操作,校正pH7.4(根据需要而定),大约每20ml的汉克斯氏液加入0.5ml的碳酸氢钠可达pH7.4,此时颜色应是黄红色。

 

(三)厄尔(Earle)氏液

原液甲:

NaCl                        68g         

NaHCO3                    22g

KCl                      4g          

葡萄糖                       10g

NaH2PO4·2H2O             1.4g            

双蒸馏水                     1000ml

原液乙:

CaCl2                         2g         

MgCl2·6H2O                1.7g

双蒸馏水                      500ml

使用时按下方配即成厄尔氏液:原液甲2份、原液乙1份、双馏水17份,滤器过滤,无菌检查合格后,保存5下备用。保存期1个月。

(四)供组织培养用的磷酸盐缓冲盐水(简称PBS):

NaCl                          8g            

Na2HPO4                     1.15g

KC1                        0.2g         

KH2PO4                      0.2g

CaCl2                          0.1g          

MgCl2·6H2O                 0.1g

双蒸馏水                       1000ml

滤器过滤,此液pH7.3,保存于5。当有沉淀发生时,不能供组织培养用。

下列供其它用途的磷酸盐缓冲液,不能用于组织培养,注意区别。

1 NaCl                     7.65g     

KH2PO4                     0.21g

Na2HPO4                    0.724g       

蒸馏水                    1000ml

此液PH7.2。

2 NaCl                     8.5g          

NaH2PO4·2H2O              0.22g

Na2HPO4                    1.2g         

蒸馏水                    1000ml

(五)乙二胺四乙酸二钠(简称EDTA,C10H14O6N2Na2·2H2O)溶液

乙二胺四乙酸二钠         0.05g      

Na2HPO4                    0.288g

KH2PO4                     0.55g

NaCl                    2g      

KCl                         0.05g 

双蒸馏水                250ml

910分钟灭菌,4下保存备用,可代替胰蛋白酶溶液来消化传代细胞。

(六)5%乳蛋白水解物  5g乳蛋白水解物加入双馏水100ml,待其完全溶解后,装瓶,910分钟灭菌,冷后置4保存。亦可用汉克斯氏液直接配成0.5%的溶液便于应用,但不宜长时间保存。

 

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