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病毒学实验技术(1)



录入时间:2011-8-10 8:35:10 来源:百度

 

一、病毒诊断用病料的采集

病毒分离用生物学材料的最理想的采集时期,是在机体尚未产生抗体之前的疾病急性期。

各种病料,例如血液、鼻咽拭子、粪、尿、脓汁、水泡液、皮肤病变、脊髓液和活体穿刺材料以及剖检时采取的组织,均可用于病毒分离。每个具体疾病需要采取什么样的生物标本,可参考有关疾病的叙述,特别是其诊断部分。

有一些总的规则适用于病毒分离用的组织的正确选择。呼吸道疾病在急性期,通常在鼻或咽分泌物排出病毒。在痘病的水泡液中或痂皮内也可发现病毒。许多全身性卡他性疾病具有病毒血症期,易于由血液中分离到病毒。实际上急性发病期间,机体的所有分泌物中都含有病毒。与中枢神经系统有关的疾病较特殊,但也可由血液或病死动物的脑内分离病毒。采取组织标本时一个最为重要的注意事项,就是必须在动物死亡后立即进行——必要时可扑杀濒死动物,就更有利于病毒分离。同时应采取该动物血液作血清学试验,在冰冻前必须先从全血中分离血清,因为溶血标本经常不再能做某些血清学试验。

各种病毒的生物物理学和生物化学特性明显不同。许多病毒对热及酸敏感,故在采集材料时必须特别注意。尤其是必须采取新鲜材料,并立即置-60-70下冰冻。此外,在用这些病料接种组织培养物或试验动物分离病毒时,时间尽量要短。如无其他方法,可将组织标本低温冰冻后置-20保存,等待取来干冰后再贮藏和送往实验室。将标本放入宽口保温瓶或以泡沫苯乙烯隔热的纸板盒内,再用冰充填,也可达到这一目的。如果没有干冰,则可应用50%甘油;某些病毒在此种溶液中能比其他一些病毒存活更久。将小块组织、粪或粘液装入小瓶内,再向瓶内注满50%甘油,并贮存于6。

组织标本应以无菌器械在无菌条件下采取。如果想要了解组织中的病毒分布,则必须应用分开的器械采取每个组织。经常应用紧盖的灭菌旋帽瓶子贮存可疑的组织和液体。如将液体标本瓶放入干冰内,则应紧盖瓶塞,因干冰的气相就是CO2,CO2可因改变液体的pH值使不耐酸的病毒灭活。如果瓶盖漏气,则将其放入密封的塑料袋内也可达到目的。

二、包涵体的检查

用狂犬病脑切片的内基氏(Negri)小体或其他包涵体标本片示教。若有狂犬病的病料组织,可用清洁的玻片作触片,干燥后置甲醇中固定,以姬姆萨氏染液染1小时,水洗,干燥,镜检。

通常可用塞勒(Seller)氏染色法检查狂犬病的包涵体。

(一)塞勒氏染液配制

1.先配好1%美兰(即亚甲蓝)的纯甲醇溶液和1%碱性复红(即碱性一品红)的纯甲醇溶液。两液分别置瓶中加塞塞紧后,于冷处可长期保存。

2.用前将两份美兰液与一份复红液混合,即为塞勒氏染液。用前试验,以神经组织间质染成淡红色为妥,若红色过浅酌加复红液,红色过深酌加美兰液。

(二)塞勒氏染色法  将新鲜脑组织触片(触片不干也可以)浸于塞勒氏染液3秒钟,取出,用普通水冲洗,自然干燥后镜检。

(三)结果  狂犬病包涵体在神经组织的胞质中,嗜酸性,呈樱桃红色。嗜碱性组织与细胞核呈深蓝色,神经细胞质呈蓝紫色,间质呈粉红色,神经纤维呈桃红色,神经鞘不着色。

 

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