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微生物技术资料
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海水中噬菌体的分离



录入时间:2011-6-27 14:40:46 来源:互联网

 
1 样品采集 
 
将一定的样品放入灭菌三角瓶中,加入对数生长期的敏感指示菌如大肠杆菌菌液3~5mL,再加20mL二倍肉汤蛋白胨培养液。
 
2 增殖培养 
 
30℃振荡培养12~18h, 使噬菌体增殖。
 
3 离心分离 
 
将上述培养液以3000rpm离心15~20min,取上清液,用pH7.0,1%蛋白胨水稀释至10-2~10-3,用于噬菌体检查及效价测定。
 
4 生物测定法
 
4.1双层琼脂平板法 
 
4.1.1 倒下层琼脂 
融化下层培养基,倒平板(约10mL/皿)待用。
 
4.1.2倒上层琼脂 
 
融化上层培养基,待融化的上层培养基冷却至50℃左右时,每管中加入敏感指示菌 (大肠杆菌) 菌液0.2mL,待检样品液或上述噬菌体增殖液0.2~0.5mL,混合后立即倒入上层平板铺平。
 
4.1.3恒温培养 
 
30℃恒温培养6~12h观察结果。
 
4.1.4 观察结果 
 
如有噬菌体,则在双层培养基的上层出现透亮无菌圆形空斑──噬菌斑。
 
4.2 单层琼脂平板法 
 
省略下层培养基,将上层培养基的琼脂量增加至2%,融化后冷却至45℃左右,如同上法加入指示菌和检样,混合后迅速倒平板。30℃恒温培养6~16h后观察结果。
 
4.3离心分离加热法(快速检查) 
 
取大肠杆菌正常培养液和侵染有噬菌体的异常大肠杆菌培养液,4000rpm离心20min,分别取两组发酵液的上清液(A1),一部分于721分光光度计上测定OD650光密度值,另外各取5mL上清液于试管中,置水浴中煮沸2min(A2),检测A2溶液OD650光密度值,记录结果。 

 

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