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土壤微生物分离纯化及测数



录入时间:2011-6-13 14:18:45 来源:互联网

   
一、实验目的要求
1 了解土壤微生物的分离纯化及测数的基本原理。
2 学习并掌握微生物分离纯化技术方法。
3 学习并掌握微生物平板菌落计数的技术方法。
 
二、基本原理
土壤是微生物生活的大本营,其中含有大量不同类型的微生物,可按照一定的方法将各类微生物通过分离进行纯培养,并能对特定类群进行数量测定。基本原理是通过稀释使菌体细胞充分分散,单细胞得以生长发育形成菌落,可使用稀释法或平板划线法进一步纯化,还可通过平板菌落计数,推算单位重量土壤样品含有微生物的数量。
三、实验步骤
(一)土壤样品采集
在待测田块上,若田块面积小于50平方米则按对角线三点采样,若田块面积大于50平方米按对角线五点采样。采样一般定点于耕作层0--20cm,先除去表土1--2cm,以无菌铲采土足量充分混匀后用无菌塑料袋分装。
(二)好气性细菌的分离纯化及测数
1.制备土样稀释液
  吹吸三次混匀
  无菌操作
 
另留一管不稀释留作对照(CK)
2.培养基的准备
融化牛肉膏蛋白胨培养基,融化后保温在48℃。并取6个无菌培养皿,分别在皿底贴好标签,注明10-5、10-6、CK(每个稀释度要两个平行皿,对照要两个平行皿)。
3.倾注法接种
先按10-6,10-5的顺序将不同稀释度菌悬液接入对应平皿中(每个平皿接入1ml),再向每个平皿倾注约15 ml的牛肉膏蛋白胨培养基(48℃)待冷凝,混合均匀。

 

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