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假单孢菌属检验



录入时间:2011-5-4 10:48:26 来源:食品伙伴网

假单孢菌属检验
 Pseudomonos
一、假单胞菌属(Pseudomonos)
假单胞菌属(Pseudomonos)为革兰氏染色阴性的直或微弯曲杆菌,大多有鞭毛(鼻疽杆菌无鞭毛),无芽孢和荚膜,非抗酸性,严格需氧。个别种能利用反硝化作用进行厌氧呼吸。DNA的G+C含量在50~70mol%。该属细菌约有140多种,其中已发现对人和动物有重要意义的20多种。鼻疽杆菌、类鼻疽杆菌等为致病菌。该属细菌中对人和动物有重要意义的20多种。鼻疽杆菌、类鼻疽杆菌等为致病菌。食品中污染的假单胞菌最常见的有铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌、腐败假单胞菌及嗜麦芽假单胞菌等。椰毒假单胞菌可引起人的食物中毒。假单胞菌属广泛分布在土壤、淡水和海水环境中,污染肉类、鱼类及其它食品,在适当条件下大量繁殖,造成这些食品腐败变质,引起食物型的肠道症状。
二、铜绿假单胞菌(Ps. aureginosa)
(一)生物学特性
-形态染色特性
铜绿假单胞菌又称为绿脓杆菌,是土壤中最普遍存在的细菌之一。本菌为革兰氏阴性杆菌,大小为1.5~3.0×0.5um,在菌体一端有一根鞭毛,能运动,不形成芽孢和荚膜。有菌毛,可传递质粒耐药因子(R因子)。菌体长短不一,有的为球杆状,有的呈长丝状。单个、成对排列,或形成短链。
-培养特性
专性需氧。生长温度范围20~42℃,最适温度35℃。致病性菌株在42℃生长,但不在4℃生长,籍此可与荧光假单胞菌鉴别。对营养无特殊要求,在普通培养基上生长良好,在选择培养基如麦康凯琼脂、SS琼脂上也能生长。普通琼脂:形成圆形、边缘不整齐、扁平稍隆起、光滑湿润且常呈融合状态的菌落,能产生水融性色素而使琼脂被染成蓝绿或黄绿色。血平板:菌落大而扁平,湿润,有金属光泽,有特殊气味,颜色灰绿或蓝绿,菌落周围形成透明溶血环。普通肉汤:可在液面形成菌膜,肉汤稍混浊或透明,上部为蓝绿色,振荡后菌膜易乳化,色素均匀分布。绿脓杆菌可产生多种色素,主要是绿脓素(为绿脓杆菌所特有)。此为无荧光的吩嗪类色素,蓝绿色,水溶性,并能溶于氯仿。此外,还可产生青脓素(即荧光色素)、红脓素(水溶性的红色色素)、黑脓素(棕黑色水溶性色素)等。但个别菌株不产生色素。
-生化特性
能氧化分解葡萄糖、木糖,产酸不产气;氧化酶阳性;能液化明胶;分解尿素;能利用枸橼酸盐;不产生吲哚;能还原硝酸盐为亚硝酸盐,或产生氮气。
-抗原特性
本细菌有O抗原、H抗原和被膜抗原。其中O抗原有两种成分,即绿脓杆菌内毒素和原内毒素蛋白质(OEP),前者成分中脂多糖(LPS)是型特异性抗原,为绿脓杆菌重要的致病因子;OEP是保护性抗原,广泛存在于假单胞菌属其它细菌和多种革兰氏阴性菌中。被膜抗原存在于菌体表面,具有免疫原性,可刺激机体产生特异性抗体。
-致病性
绿脓杆菌为条件致病菌,当机体抵抗力下降时,可引起各种继发感染或混合感染,是医院感染的主要病原菌之一,近年来对动物感染的报道逐年增加。绿脓杆菌常为天然广谱耐药菌株。
Pseudomonas aeruginosa is an opportunistic pathogen. The bacteria takes advantage of an individual's weakened    immune system to create an infection and this organism also produces tissue-damaging toxins.
Pseudomonas aeruginosa causes urinary tract infections, respiratory system infections, dermatitis, soft tissue infections, bacteremia, bone and joint infections, gastrointestinal infections and a variety of systemic infections, particularly in patients with severe burns and in cancer and AIDS patients who are immunosuppressed.
(二)分离与鉴定
1 常规检验法 根据绿脓杆菌对营养要求不高、在普通琼脂和血平板上的菌落特性及产生绿脓素等特点,不难进行鉴定。但对不产生色素者,尚需进行生化和血清学试验予以检查。
2 血清学反应 除常规检查法外,鉴定绿脓杆菌还采用间接血凝试验(IHA)、协同凝集试验及ELISA等方法。
(1)间接血凝试验(IHA):是用经鞣酸处理的绵羊红细胞吸附OEP作为致敏抗原,测定血清中抗OEP抗体效价。该方法非常敏感,血清稀释到上万倍仍可检出抗体。
(2)协同凝集试验:此法用于检测细菌本身并分型。用SPA—绿脓杆菌分型血清,与待检菌的3~6h培养物作玻片凝集试验。与普通玻片凝集试验相比,本方法不仅可缩短时间(15~18h),还可提高分型率。
(3)ELISA:此法用于检测绿脓杆菌滤液LPS,且不受其它革兰氏阴性菌LPS的影响,特异性强。
三、污染食品的其它常见假单胞菌
(一)荧光假单胞菌(Ps. fluorecens)
荧光假单胞菌为革兰氏阴性单个或成对排列的杆菌,形态类似绿脓杆菌。单端丛毛,运动活泼。本菌专性需氧,温域4~30℃,最适温度25~30℃,在37℃或42℃不生长,但常可耐受37℃。因此,除低温培养外,通常荧光假单胞菌的检出率较低。营养要求不高,在普通琼脂上生长,也可在麦康凯琼脂和SS琼脂上生长。菌落呈浅黄绿色,在紫外线照射下呈现荧光。少数菌株无荧光,只有黄色或绿色色素,但不是绿脓素。产生荧光素的菌株约有94%,该色素水溶性,但不溶于氯仿。氧化酶阳性;能氧化分解葡萄糖、木糖,产酸不产气;能液化明胶;水解精氨酸;能利用醋酸盐为唯一碳源。
图: A scanning electron micrograph of the aerobic soil bacterium Pseudomonas fluorescens. The bacterium uses its long, whiplike flagellae to propel itself through the water layer that surrounds soil particles.
(二)腐败假单胞菌
腐败假单胞菌是腐物寄生菌。一端单鞭毛,有的有侧鞭毛,运动活泼。无芽孢,无荚膜。本菌需氧,对营养无特殊要求,铵离子可作为唯一氮源,醋酸盐可作为唯一碳源和能源。在22~30℃生长良好,4℃可生长,42℃生长不定。在琼脂培养基上可形成淡红褐色或粉红色、略带黏液样菌落。在卵黄琼脂、DNA酶琼脂和假单胞菌琼脂P培养基上,可产生淡红褐色荧光色素。在假单胞菌琼脂F上则产生黄色水溶性荧光色素。由于本菌能产生硫化氢,能使三糖铁琼脂底部变黑,易与沙门氏菌、变形杆菌相混淆。氧化酶阳性;DNA酶阳性;鸟氨酸脱羧酶阳性;能分解葡萄糖,但有些菌株迟缓分解或不分解。
本菌在自然界分布广泛,存在于土壤和水体中。可自牛乳、乳酪、蛋品、河水、污水、组织培养液、油乳剂、天然气、石油产品中分离到。能使乳酪、蛋品、鱼类腐败并产生硫化氢。
(三)嗜麦芽假单胞菌(Ps. maltophilia)
为细长杆菌,单端丛毛。在普通琼脂培养基上形成不透明、淡灰黄色菌落,有非水溶性色素。血平板上不溶血。不还原硝酸盐。可迟缓氧化分解葡萄糖,对麦芽糖氧化分解迅速。赖氨酸脱羧酶阳性。有DNA酶。液化明胶。葡萄糖酸氧化阴性。无卵磷脂酶。本菌广泛存在于自然界,存在于井水、河水、污水、石油地带的土壤、豆科植物的病体以及人和动物体表。可从污染的冷藏鱼类、组织培养液中检出,且临床检出率日渐增多。常引起鱼类、肉、蛋类的腐败。

 

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