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小肠结肠炎耶尔森氏菌检验(3)



录入时间:2011-3-28 10:07:51 来源:食品伙伴网

培养基
 
  (一)改良磷酸缓冲液
  成分:磷酸氢二钠(Na2HpO4
8.23g
     磷酸二氢钠(NaH2PO4·H2O)
1.20g
     氯化钠
5g
     蒸馏水
1000mL
     山梨醇
20g
     三号胆盐
15g
 
制法:将磷酸盐及氯化钠溶于蒸馏水中,再加山梨醇及胆盐,溶解后校正pH为7.6,分装试管,于121℃高压灭菌15min备用。
 
(二)CIN-I培养基
  成分:胰胨
20g
     酵母浸膏
2g
     甘露醇
20g
     氯化钠
1g
     丙酮酸钠
2g
     去氧胆酸钠
2g
     硫酸镁(MgSO4·7H2O)
0.01g
     琼脂
12g
     蒸馏水
950mL
             pH7.4±0.1
 
 
制法:上述成分溶于蒸馏水中,121℃高压灭菌15min,待冷至80℃时加入二苯醚(用95%的乙醇配成0.4%的溶液)1mL,混匀,冷至50℃左右时加入中性红(3mg/mL)10mL,结晶紫(0.1mg/mL)10mL,头孢霉素(1.5mg/mL)10mL,新生霉素(0.25mg/mL)10mL,最后不断搅拌,加入10%的氯化锶10mL,倒平皿。
 
(三)改良y培养基
  成分:蛋白胨
15g
     氯化钠
10g
     乳糖
2g
     草酸钠
2g
     去氧胆酸钠
6g
     三号胆盐
5g
     丙酮酸钠
2g
     孟加拉红
40mg
     水解酪蛋白
5g
     琼脂
17g
     蒸馏水
1000ml
             ph7.4±0.1
 
 
制法:将上述成分溶解于蒸馏水,121℃ 15min高压灭菌。
 
 
(四)改良克氏双糖铁琼脂
  成分:蛋白胨
20g
     牛肉膏
3g
     酵母浸膏
3g
     甘露醇
20g
     葡萄糖
1g
     氯化钠
5g
     柠檬酸铁铵
0.5g
     硫代硫酸钠
0.5g
     琼脂
12g
     酚红
0.025g
     蒸馏水
1000mL
             pH7.4
 
 
制法:除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH,加入琼脂,加热煮沸以溶化琼脂,加入0.2%酚红水溶液12.5mL摇匀,分装试管,121℃高压灭菌15min,放置高层斜面备用。
 
 
(五)糖发酵培养基
  成分:牛肉膏
5g
     蛋白胨
10g
     氯化钠
3g
     磷酸氢二钠
2g
     0.2%溴麝草酚蓝溶液
12mL
     蒸馏水
1000mL
 
制法:将上述成分配好后,分装每瓶100mL,121℃高压15min灭菌,另将蔗糖、棉子粮、山梨醇、甘露醇、鼠李糖等分别配成10%溶液,同时高压灭菌,将5mL糖液加入100mL培养基内,以无菌操作分装小试管。
 
 
(六)氨基酸脱羧酶试验培养基
  成分:蛋白胨
5g
     酵母浸膏
3g
     葡萄糖
1g
     蒸馏水
1000mL
     1.6%溴甲酚紫乙醇溶液
1mL
     L-氨基酸或DL氨基酸
0.5或1g/100mL
             pH6.8
 
 
制法:除氨基酸以外,将其他成分加热溶解,分装每瓶100mL,分别加入各种氨基酸,校正pH,对照培养基不加氨基酸,分装试管,每管0.5mL,上面滴加一层液体石蜡,115℃高压灭菌10min。
试验方法:接种培养物后于37℃培养24h观察结果,阳性者产碱,培养其呈紫色,阴性者无碱性产物,但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色,对照管应为黄色。
 
 
(七)缓冲葡萄糖蛋白胨水(V-P试验用)
  成分:磷酸氢二钾
5g
     多胨
7g
     葡萄糖
5g
     蒸馏水
1000mL
             pH7.0
 
 
制法:将上述成分溶化后校正pH,分装小试管,每管1mL,121℃高压灭菌15min。
试验方法:接种培养物于37℃培养2~4d,加入6%α-萘酚酒精溶液0.5mL和40%氢氧化钾溶液0.2mL,充分振摇试管,观察结果,立刻或数分钟内出现红色者为阳性反应。
 
 
(八)碱处理液
氢氧化钾0.5g,氯化钠0.5g,加入蒸馏水100mL配成0.5%氢氧化钾-氯化钠溶液。
 
 
(九)动力试验培养基
  成分:蛋白胨
1g
     牛肉膏
0.3g
     氯化钠
0.5g
     琼脂
0.35~0.4g
     蒸馏水
100mL
 
制法:按以上成分配好,煮沸使溶解,校正pH为7.4,分装小管,121℃高压灭菌15min,起立凝固备用。
 
 
(十)尿素培养基
  成分:尿素
20g
     酵母浸膏
0.1g
     磷酸二氢钾(KH2PO4
9.1g
     磷酸氢二钠(Na2HPO4
9.5g
     酚红
0.01g
     蒸馏水
1000mL
 
制法:将上述成分于蒸馏水中溶解,校正pH为6.8±0.2,不要加热,过滤除菌,无菌分装于灭菌小试管中,每管2~3mL。
 

 

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