附 录 A
（规范性附录）
常用培养基配方
A.1 营养琼脂
A.1.1 成分
蛋白胨 10.0 g
牛肉膏 3.0 g
氯化钠(NaCl) 5.0 g
琼脂 18.0 g
蒸馏水 1000 mL
pH 7.2～7.5
A.1.2 配制要点
将各种成分溶解于蒸馏水内，调节pH，再加琼脂，加热溶化后分装。121℃高压灭菌30min。
A.1.3 用途
适用于一般细菌培养和保藏。
A.2 芽孢杆菌培养基
A.2.1 成分
蛋白胨 5.0 g
牛肉膏 3.0 g
土壤浸出液 250 mL
蒸馏水 750mL
琼脂 18.0 g
A.2.2 配制要点
土壤浸取液：土壤50g，加水200mL，121℃灭菌1h，过滤补水至250mL。
其他同A.1.2
A.2.3 用途
适用于芽孢杆菌的保藏。
A.3 阿须贝氏（Ashby）培养基
A.3.1 成分
磷酸二氢钾(KH2PO4) 0.2 g
硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.2 g
氯化钠(NaCl) 0.2 g
碳酸钙(CaCO3) 5.0 g
甘露醇(C6H14O6) 10.0 g
硫酸钙(CaSO4·2H2O) 0.1 g
琼脂 18.0 g
蒸馏水 1 000 mL
pH 6.8～7.0
A.3.2 配制要点
同A.1.2
A.3.3 用途
用于固氮菌的培养。
A.4 根瘤菌培养基YM
A.4.1 成分
磷酸氢二钾(K2HPO4·3H2O) 0.5 g
硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.2 g
氯化钠(NaCl) 0.1 g
甘露醇(C6H14O6) 10.0 g
酵母膏 1.0 g
0.5%刚果红溶液 5 mL
琼脂 18.0 g
蒸馏水 1 000 mL
pH 6.8～7.0
A.4.2 配制要点
将各种营养成分溶解于蒸馏水内，调节pH后，加入刚果红溶液。再加琼脂，加热溶化后分装。121℃高压灭菌30min。
A.4.3 用途
适用于根瘤菌的培养。
A.5 根瘤菌培养基= 2 * ROMAN II
A.5.1 成分
酵母粉 1.0 g
甘露醇(C6H14O6) 10.0 g
土壤浸出液 200 mL
琼脂 15.0 g
蒸馏水 800 mL
pH 7.2
A.5.2 配制要点
土壤浸出液：土壤50g，加水200mL，121℃灭菌1h，过滤补水至200mL。
其他同A.1.2
A.5.3 用途
适用于根瘤菌的保藏和培养。
A.6 硅酸盐细菌培养基
A.6.1 成分
蔗糖（C12H22O11） 5.0 g
磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O) 2.0 g
硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.5 g
碳酸钙(CaCO3) 0.1 g
三氯化铁(FeCl3·6H2O) 0.005 g
琼脂 18.0 g
蒸馏水 1 000 mL
pH 7.5～8.0
A.6.2 配制要点
先将三氯化铁配制成5‰的溶液，按量加入，其他同A.1.2
A.6.3 用途
适用于硅酸盐细菌的培养。
A.7 固氮（茎瘤）根瘤菌培养基
A.7.1 成分
乳酸钠（C3H5O3Na） 10.0 g
磷酸氢二钾(K2HPO4·3H2O) 1.67 g
磷酸二氢钾(KH2PO4) 0.87 g
氯化钠(NaCl) 0.05 g
氯化钙(CaCl2) 0.04 g
三氯化铁(FeCl3·6H2O) 0.004 g
硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.1 g
酵母膏 1.0 g
琼脂 18.0g
蒸馏水 1 000 mL
pH 6.8～7.0
A.7.2 配制要点
先将三氯化铁配制成4‰的溶液按量加入，其他同A.1.2。
A.7.3 用途
适用于茎瘤根瘤菌的培养。
A.8 马丁培养基
A.8.1 成分
磷酸二氢钾(KH2PO4) 1.0 g
葡萄糖(C6H12O6·H2O) 10.0 g
硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.5 g
蛋白胨 5.0 g
1%孟加拉红水溶液 3.3 mL
氯霉素 0.1 g
琼脂 18.0 g
蒸馏水 1 000 mL
A.8.2 配制要点
将营养成分用蒸馏水溶解后，按量加入1%孟加拉红水溶液，氯霉素先用少量乙醇溶解后加到培养基中。再加琼脂，加热溶化后分装。115℃高压灭菌20min。
A.8.3 用途
适用于真菌的培养。
A.9 高氏合成一号琼脂
A.9.1 成分
硝酸钾(KNO3) 1.0 g
磷酸氢二钾(K2HPO4·3H2O) 0.5 g
硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.5 g
氯化钠(NaCl) 0.5 g
硫酸亚铁(FeSO4·7H2O) 0.01 g
可溶性淀粉(C6H10O5)n 20.0 g
重铬酸钾（K2Cr2O7） 0.1 g
琼脂 18.0 g
蒸馏水 1 000 mL
pH 7.2～7.4
A.9.2 配制要点
淀粉用少量冷水调成糊状,加热溶解后加入。再加琼脂，加热溶化后分装，121℃高压灭菌30min。重铬酸钾配制成溶液单独灭菌，使用时再加入到培养基中。
A.9.3 用途
适用于放线菌的培养。
A.10 联合固氮菌培养基
A.10.1 成分
D-葡萄糖酸钠(C6H10NaO7) 5.0 g
磷酸二氢钾(KH2PO4) 0.4 g
磷酸氢二钾(K2HPO4·3H2O) 0.1 g
硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.2 g
酵母膏 1.0 g
氯化钠(NaCl) 0.1 g
氯化钙(CaCl2) 0.02 g
三氯化铁(FeCl3·6H2O) 0.01 g
钼酸钠（Na2MoO4） 0.002 g
琼脂 18.0 g
蒸馏水 1 000 mL
pH 6.8～7.0
A.10.2 配制要点
将氯化钙配、钼酸钠分别配制成2‰的溶液，按量加入，其他同A.1.2。
A.10.3 用途
适用于固氮螺菌的培养。
A.11 马铃薯葡萄糖琼脂培养基
A.11.1 成分
马铃薯 200 g
葡萄糖(C6H12O6·H2O) 20.0 g
琼脂 18.0 g
蒸馏水 1 000 mL
A.11.2 配制要点
称取去皮马铃薯200g切块，放入水中煮沸30min，然后用双层纱布过滤取汁，再加葡萄糖和琼脂，溶化后补足水至1000mL，115℃灭菌20min。
A.11.3 用途
适用于酵母菌的培养。
A.12 麦芽汁琼脂
A.12.1 成分
12波林麦芽汁（Brix） 1 000 mL
琼脂 18.0 g
pH 5.4
A.12.2 配制要点
将麦芽汁调至12波林的糖度，调节pH，加入琼脂，加热溶化后分装。115℃高压灭菌20min。
A.12.3 用途
适用于酵母菌的培养和保藏。
A.13 乳酸细菌培养基（MRS）
A.13.1 成分
蛋白胨 10.0 g
牛肉膏 10.0 g
酵母膏 5.0 g
柠檬酸氢二铵[(NH4)2C6H6O7] 2.0 g
葡萄糖(C6H12O6·H2O) 20.0 g
吐温80 1.0 g
乙酸钠（CH3COONa·3H2O） 5.0 g
磷酸氢二钾(K2HPO4·3H2O) 2.0 g
硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.58 g
硫酸锰(MnSO4·H2O) 0.25 g
琼脂 18.0 g
蒸馏水 1 000 mL
pH 6.2～6.6
A.13.2 配制要点
将各种成分溶解于蒸馏水内，调节pH，再加琼脂，加热溶化后分装。121℃高压灭菌20min。
A.13.3 用途
适用于乳酸菌的培养。
A.14 光合细菌培养基= 1 * ROMAN I
A.14.1 成分
酵母粉 3.0 g
蛋白胨 3.0 g
硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.5 g
氯化钙（CaCl2） 0.3 g
蒸馏水 1 000 mL
pH 6.8～7.0
A.14.2 配制要点
同A.1.2。
A.14.3 用途
适用于光合细菌的培养。
A.15 光合细菌培养基= 2 * ROMAN II
A.15.1 成分；
溶液= 1 * ROMAN I
氯化钙（CaCl2） 75 mg
乙酸钠（CH3COONa） 1.6 g
烟酸 40 mg
氯化钠(NaCl) 1.5 g
生物素 40 mg
酵母膏 2.0 g
硫胺素 40 mg
氯化镁(MgCl2) 200 mg
乙二胺四乙酸铁（EDTA-Fe）溶液 5 mL
微量元素溶液 1 mL
蒸馏水 800mL
溶液= 2 * ROMAN II
磷酸二氢钾(KH2PO4) 600 mg
磷酸氢二钾(K2HPO4·3H2O) 1.18 g
蒸馏水 200 mL
将溶液= 1 * ROMAN I、溶液= 2 * ROMAN II分别于121℃高压灭菌15min，冷却后将溶液= 1 * ROMAN I、溶液= 2 * ROMAN II混匀。
微量元素溶液：
乙二胺四乙酸二钠（C10H14N2Na2O8·2H2O） 2.0 g
硼酸（H3BO3）100 mg
氯化锌（ZnCl2） 100 mg
高钼酸钠（Na2MoO4·2H2O） 20 mg
氯化铜（CuCl2） 10 mg
硫酸亚铁(FeSO4·7H2O) 2.0 g
氯化钴（CoCl2·6H2O） 100 mg
氯化锰（MnCl2·4H2O） 100 mg
氯化镍（NiCl2·6H2O） 20 mg
亚硒酸钠（Na2SeO3） 1 mg
蒸馏水 1 000 mL
乙二胺四乙酸铁（EDTA-Fe）溶液:
乙二胺四乙酸铁（EDTA-Na2） 20.0 g
硫酸亚铁(FeSO4·7H2O) 20.0 g
蒸馏水 1 000 mL
A.15.2 配制要点
乙二胺四乙酸铁（EDTA-Fe）溶液需要通气过夜，维生素类物质要过滤除菌后按量加入到培养基中。。
A.15.3 用途
适用于光合细菌的培养。
A.16 乳糖胆盐发酵培养基(用于大肠菌群初步发酵)
A.16.1 成分
蛋白胨 20.0 g
猪胆盐 5.0 g
乳糖 10.0 g
0.04%溴甲酚紫溶液 25.0 mL
蒸馏水 1 000 mL
pH 7.2～7.4
A.16.2 配制要点
将各种成分溶解于蒸馏水内，调节pH，然后加入溴甲酚紫溶液，分装到试管中，并放入小倒管。115℃高压灭菌15min。
A.16.3 用途
用于乳糖发酵实验。
A.17 伊红美蓝琼脂
A.17.1 成分
蛋白胨 10.0 g
乳糖 10.0 g
磷酸氢二钾(K2HPO4·3H2O) 2.0 g
2%伊红水溶液 20.0 mL
0.65%美蓝水溶液 10.0 mL
琼脂 20.0 g
蒸馏水 1 000 mL
pH 7..2～7.4
A.17.2 配制要点
将蛋白胨、乳糖、磷酸盐溶解于蒸馏水内，调节pH，加入琼脂，加热溶解，分装。115℃高压灭菌15min备用。伊红和美蓝溶液分别在121℃下高压灭菌20min。使用时加入已灭菌的伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。
A.17.3 用途
用于大肠菌群的分离培养。
A.18 乳糖发酵培养基
A.18.1 成分
蛋白胨 20.0 g
乳糖 10.0 g
0.04%溴甲酚紫溶液 25.0 mL
蒸馏水 1 000 mL
pH 7.2～7.4
A.18.2 配制要点
将各种营养成分溶解于蒸馏水内，调节pH，然后加入溴甲酚紫溶液，分装至试管，并放入小倒管。115℃高压灭菌15min。
A.18.3 用途
用于大肠菌群验证实验。
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