银河澳门官网入口,银河集团网址登录

银河澳门官网入口,银河集团网址登录

中文版  |   English  |   加入收藏  |   客服热线:400-0532-596
微生物技术资料
文章检索
  首页 > 微生物知识->微生物基本知识->紫丹活血片微生物检查方法学验证

紫丹活血片微生物检查方法学验证



录入时间:2010-11-25 10:14:32 来源:维普

 

摘 要:目的:建立紫丹活血片微生物限度检查标准方法。方法:按《中国药典》2005版的有关要求.通过接种代表性的阳性菌株,采用常规法、薄膜过滤法、稀释法进行方法学验证。结果:常规法对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、黑曲霉菌的回收率均高于70%,对枯草杆菌、白色念珠菌的回收率均低于70%。采用薄膜过滤法每筒冲洗400ml(4),可以消除样品对枯草杆菌、白色念珠菌的抗菌活性,使其正常生长;控制菌检查采用稀释法进行检查。结论:本样品可以采用薄膜过滤法及稀释法进行测定。

    
关键词:紫丹活血片;微生物限度检查;常规法;薄膜过滤法;稀释法;冲洗量;方法学验证

    
中图分类号:R927.1 文献标识码:A

    
文章编号:1007-2349(2007)12-0034-02

    
紫丹活血片具有活血化瘀,理气止痛之功能.临床用于气滞血瘀所致胸痹(冠心病心绞痛)、眩晕(脑动脉硬化)。当建立药品的微生物限度检查法时,应进行方法的验证,以证明所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌及酵母菌数的测定及控制菌检查。按《中国药典》2005版的有关要求,通过接种代表性的阳性菌株,发现紫丹活血片具有抑菌活性,采用薄膜过滤法,可以消除紫丹活血片抑菌活性,确定了薄膜过滤法的最佳冲洗量和实验条件,建立了微生物限度检查方法。

    1
仪器与材料

    1.1
仪器 HTY-Ⅲ型智能集菌仪,(杭州泰林医疗器械厂生产;开放式一次性薄膜过滤器,北京牛牛基因技术有限公司,批号:20051005)。

    1.2
样品 紫丹活血片(云南天利药业有限公司生产,规格0.4g/粒,批号20060301)。

    1.3
培养基 胆盐乳糖增培养基(批号,05222),玫瑰红钠琼脂培养基(批号,030710),营养琼脂培养基(批号,050328),改良马丁琼脂培养基(批号,010315),营养肉汤培养基(批号,041010),PH7.0氯化钠一蛋白胨缓冲液(批号,050217)

    1.4
菌种 大肠埃希菌(Escherichia coli)[CMCC(F)44102]、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[CMCC(B)63 501]、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)[CMCC(B)26 003]、白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F)98 001]、黑曲霉(Aspergillus niger)[CMCC(F)98 003](中国药品生物制品检定所提供)。

    2
方法验证

    
微生物限度检查的验证实验按中国药典2005版微生物限度检查法(附录ⅪJ)常规法和薄膜过滤法进行。

    2.1
菌液制备 取上述经34℃培养1824h的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌肉汤液体培养物1ml,加入9ml 0.9%氯化钠溶液中,10倍稀释至10-510-7备用;取经24℃培养1824h的白色念珠菌霉菌液体培养物1ml.加入9ml 0.9%氯化钠溶液中,10倍稀释至10-5备用;取经培养一周的黑曲霉菌斜面物,加0.9%氯化钠溶液3ml,洗下孢子,转移至另一空管,标准比浊后,取1ml加入0.9%氯化钠溶液中10倍稀释至10-4备用。

    2.2
菌液的检验 取上述金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、大肠埃希菌10-510-7稀释液各1ml,用45℃营养琼脂培养基20ml注皿,各平行测定两皿,3035℃培养48h,计数,应约为50100cfu/ml;取上述白色念珠菌10-510-6稀释液及上述黑曲霉菌10-4孢子悬液各1ml,用45℃琥红琼脂培养基20ml注皿,各平行测定两皿,2328℃培养,逐日观察计数,应约为50100cfu/ml。结果见表1。

    2.3
供试液制备 取样品10g,加pH7.0无菌氯化钠一蛋白胨缓冲液100ml,混匀,取适量3000/分离心10min作为1:10的供试液。

    2.4
回收率的测定

    2.4.1
细菌数霉菌数常规法测定试验组:取1:10供试液1ml、50100cfu试验菌同时加入平皿中,立即倾注琼脂培养基,待凝固后,置规定温度培养2472h逐日观察结果。菌液组:测定每一菌株所加的试验菌数(同菌液检验)。供试品对照组:取1:10供试液1ml加入平皿中,立即倾注琼脂培养基,待凝固后,置规定温度培养2472h逐日观察结果,测定供试品本底菌数。

    2.4.2
细菌数薄膜过滤法测定 取1:10的供试液1ml,注入开放式滤器(先用少量缓冲液润湿滤器),用pH7.0无菌氯化钠一蛋白胨缓冲液冲洗滤膜,每次100ml4(总冲洗400m1).1ml(50100cfu)试验菌,抽干后,取出滤膜菌面朝上贴入规定琼脂平板培养基中,置规定温度培养48h,结果见表2。

    2.5
回收率的计算 按如下公式计算试验组的加菌回收率:回收率=(试验组一供试品对照组菌液组×100%

    2.6
控制菌检查方法的验证

    2.6.1
常规法 取1:10供试液10ml加入100ml胆盐乳糖培养基中,同时加入上述大肠埃希菌液1ml,置35℃培养24h;取稀释液10ml加入100ml胆盐乳糖培养基,置35℃培养24h.作为阴性对照;取1:10供试液10ml加入100ml胆盐乳糖培养基中,同时加入上述金黄色葡萄球菌液1ml,置35℃培养24h,作为阴性菌对照组。另取1:10供试液1ml加入10ml胆盐乳糖发酵培养基中.同时加入上述大肠埃希菌液1ml.35℃C培养24h;取稀释液1ml加入10ml胆盐乳糖发酵培养基中置35℃培养24h,作为阴性对照;取1:10供试液1ml加入10ml胆盐乳糖发酵培养基中,同时加入上述金黄色葡萄球菌液1ml,置35℃培养24h,作为阴性菌对照组。

    2.6.2
稀释法 取1:10供试液10ml加入200ml胆盐乳糖培养基中,同时加入上述大肠埃希菌液1ml,置35℃培养24h;取稀释液10ml加入200ml胆盐乳糖培养基,置35℃培养24h,作为阴性对照;取1:10供试液10ml加入200ml胆盐乳糖培养基中,同时加入上述金黄色葡萄球菌液1ml,置35℃培养24h,作为阴性菌对照组。

    3
结果

    
从表2结果可以看出:该供试品接种5株阳性试验菌株,常规法对枯草杆菌、白色念珠菌回收率均低于70%,对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉菌回收率均高于70%;薄膜过滤法对枯草杆菌、白色念珠菌回收率均高于70%。说明该样品具有抑菌活性,细菌数、霉菌数、酵母菌均需采用薄膜过滤法进行测定。见表3。

    4
结论

    
从表23结果可以看出,通过接种5株阳性试验菌株,经方法学验证,细菌数、霉菌数、酵母菌均需采用薄膜过滤法进行测定;控制菌大肠埃希菌需采用稀释法进行检查。

 

上一篇:公共场所茶具微生物检验方法大肠菌群测定

下一篇:淡竹叶清热作用药效植物基础研究

相关文章:
首页 | 关于我们 | 网上商城 | 在线客服 | shchuhu.com
业务联系电话
   400-0532-596 0532-66087773
   0532-66087762 0532-81935169
邮箱:qdhbywg@vip.126.com
地址:青岛市城阳区锦汇路1号A2栋
产品技术咨询
  工作日(周一至周六8:00-18:00):
  18562658263 13176865511
  其它时段:13105190021
投诉与建议:13105190021 13006536294