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粪链球菌的检验



录入时间:2010-11-12 9:58:23 来源:青岛海博

样品制备 取25g25mL样品,放入225mL灭菌生理盐水中,充分混匀,制成1:10样品稀释液。根据样品的污染程度,制成适当的10倍递增稀释液。

  a.多管法:

  用适当的稀释液接种一套叠氮化钠葡萄糖肉汤管。接种量为1mL或以下的,使用10mL单料管;接种量为10mL,使用10mL双料管。35℃培养24-48h,并检查记录各管的混浊情况。用接种环将浑浊管中的培养物划线于PSE平板上,倒置平板于36℃培养24h。平板上出现的带棕色环的黑色菌落,确证为粪链球菌。根据接种的样品量和确证为是粪链球菌的管数,查MPN表,报告每克样品中的粪链球菌MPN值。

  b.滤膜法:

  倾注融化的4-5mLKF琼脂于平板上,若平板表面有气泡,可用火焰灼除。根据样品的污染程度,使用样液的量为100,10,1.0,0.10.01mL。使用灭菌滤膜过滤样液,以能在滤膜上生长出20-100菌落为宜。将滤过样液的滤膜紧贴在KF琼脂培养基表面上,避免出现气泡。倒置平板于36℃培养48h。粪链球菌KF平板滤膜上形成暗红色至粉红色菌落。将典型菌落接种于脑心浸液斜面上,36℃培养48h。用其培养物做过氧化氢试验,过氧化氢浓度为3%,阳性反应者为非粪链球菌群细菌。将阴性反应者接种于脑心浸液肉汤,置45.5℃培养48h;同样方式接种一管胆盐肉汤,置36℃培养3天。在上述两种情况下生长者为粪链球菌。选择生长20-100菌落的滤膜,根据所使用的样品量,计算出样品每克(毫升)中的粪链球菌数。

  c.平板计数法:

   取1mL适当稀释液加入培养皿内,倾入12-15mLKFPSE培养基,转动平板充分混合。凝固后置36℃培养,KF平板培养48h,PSE平板培养24h。粪链球菌KF平板上形成暗红色至粉红色菌落,边缘整齐,琼脂表面下菌落呈椭圆或晶体状;在PSE平板上形成带棕色环的棕黑色菌落。选择有30-300菌落的平板进行记数。按粪链球菌/g(mL)报告结果。

 

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