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组织培养条件



录入时间:2010-11-9 10:34:02 来源:360图书馆

一、实验室

    组织培养是在无菌条件下进行,需要一定的实验室条件,应具备:

(一)化学试验室

用于存放各类化学药品,配制培养基等。需要的物品有:

⒈药品柜 存放化学药品。

⒉玻璃器皿柜 存放各类玻璃器皿。

⒊试验台 分别用来安放天平和配制培养基。

⒋冰箱 存放配好的母液和一些需低温保存的药品及植物材料等。

⒌其它 天平、水浴锅、酸度计、水池等。

(二)洗涤消毒室

用作器皿的洗刷、消毒、干燥等,配有高压灭菌锅、烘箱、铁架、水池等,也可与化学实验室合并。

(三)无菌操作室

用于植物材料的消毒、接种、转移、原生质体制备等。要求室内封闭,保持无菌。并具备以下物品:

⒈超净工作台 用于消毒、接种、转移培养材料。

⒉紫外灯 用于空气消毒。

⒊解剖镜 用于胚胎培养、茎尖培养时剥取外植体。

⒋低速离心机 用于原生质体制备。

(四)培养室

是供培养物生长的场所,主要有培养架、控温、控光设备等。培养架可分45层,上面安装3040W日光灯照明,每天照明1016小时左右,用自动定时器控制。温度最好保持在1525左右。此外还可根据需要安置液体培养所需的摇床、转床等。

二、常用药品

组织培养所需药品主要用于培养基的配制,也有部分用于消毒,主要有以下几类:

(一)消毒药品 

主要有次氯酸钠、次氯酸钙、双氧水、漂白精片、溴水、硝酸银等。

(二)无机盐类 

  包括大量元素和微量元素两类,主要的盐类有KNO3、MgSO4·7H2O、NH4NO3、KH2PO4、CaCl2·2H2O、Fe2SO43、Na2HPO4、CuSO4、NaNO3、Na2SO4、ZnSO4、MnSO4·4H2O、MnCl2·2H20、KI、H3BO3等,无机盐是供外植体吸收的基本营养成分,各有不同作用,如N、P影响蛋白质的合成,Ca、K、S、Mg影响酶活性等。

(三)有机化合物 

    主要有蔗糖、维生素类、氨基酸等。其中蔗糖是不可缺少的碳源,也是渗透压调节物质。维生素的主要作用是促进细胞分裂和诱导器官分化。氨基酸是蛋白质组成成分,也是有机氮源。

(四)植物生长调节剂 

    用于组织培养的主要有生长素、细胞分裂素及赤霉素三大类:

    ⒈生长素类 主要有吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、2,4D和吲哚丁酸(IBA)。2,4D有利愈伤组织生长,NAA、IAA、IBA有利于器官分化。

    ⒉细胞分裂素类 主要有激动素(KT)、6-苄基腺嘌呤(BA)、玉米素(ZT)等。其作用是促进细胞分裂与分化,其中KT能明显促进芽的分化而抑制根的形成。

    ⒊赤霉素 以GA3运用最广泛,有促进不定芽和幼株伸长的作用。

(五)有机附加物 

    包括人工合成和天然的有机物,常用的有酵母提取物、椰乳、果汁等及相应的植物组织浸出液。对细胞和组织的增殖和分化有一定促进作用。此外琼脂在组培中作为凝固剂,是外植体的支持体,常用浓度为0.51%。

(六)水 

    培养基用水原则上使用蒸馏水,去离子水等,尤其在对化学成分要求较精确的试验中。但在组培苗的批量生产中,可选用自来水配制,以降低成本

 

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