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MS培养基配制中的五点注意



录入时间:2010-11-1 9:07:48 来源:教学仪器与实验

     MS培养基广泛用于植物组织培养。除基本的化学药品配制要领外,MS培养基的配制还有一定的特殊要求, 笔者试将其总结为“ 五点注意”, 描述如下 。

1 母液配制必须严格分类

配制高浓度的母液是植物组织培养的基本功。配制母液的目的,除了多次取用、节省实验准备的时间外,还有抑制杂菌生长的作用。高浓度的母液能够有效地抑制细菌与霉菌的生长,加上低温环境 ( 4) ,能够大大增加培养基的存放时间( 一年左右 ) 。一般而言,培养基中的各个成分可以按照表1的分类方式配成母液。 

1

总类别

母液倍数

分类别

成分

大量元素

10-25

大量元素—1

NH4NO3,KNO3,KH2PO4

大量元素—2

CaCl2

大量元素—3

MgSO4

微量元素

20-50

微量元素—1

MnSO4,ZnSO4,CuSO4

微量元素—2

H3BO3,Na2MoO4,.CoCl2

微量元素—3

KI

铁盐

10-25

铁盐

EDTA-Na2,FeSO4

有机附加物

10-25

甘氨酸

甘氨酸

烟酸

烟酸

肌醇

肌醇

维生素B1

维生素B1

维生素B6

维生素B6

注:“ 母液倍数”为笔者建议 ,具体浓度应以具体用量为准。 

按照表 1的要求,每一个“分类别”为一瓶母液,按照相应的成分配制好后,4避光保存,用时按照母液倍数进行稀释即可。

母液分类的依据,是要避免MS培养基中某些成分发生沉淀反应。例如,如果将全部的大量元素混合在一起配制, KH2PO4CaCl2 易产生Ca3( PO4)2沉淀,而CaC12 MgSO4 将生成CaSO4 沉淀。 

除上述成分外,还必须加上蔗糖、琼脂以及激素,才构成用于组织培养的MS培养基。 

2 激素的溶解方法

MS培养基中常用的激素,如2,4 - D、NAA、6-BA,也要配制成 1020倍母液,这样便于称量(激素的用量极小,给称量造成不便),且可以多次取用。激素的配制与一般的药品不同,需要助溶剂。

如要配制 10 mL 1mgmL 2,4- D母液,则应称取0.01g 2,4 - D固体,置于小烧杯中, 再以 13 mL95%乙醇( 0.1 mo lL NaOH) 溶解,最后缓慢加入蒸馏水定容。即每加入1 mL蒸馏水,立即搅拌均匀,使白色沉淀消失。重复数次,直至定容 。

一般而言,生长素类物质2,4-D、 N AA) 要用95%乙醇(0.1 mo lL NaOH)助溶,而细胞分裂素类物质(6-BA)要用0.1 mo lLHC1助溶。助溶剂的用量一定要小,不能因其溶解效果好而过量使用,否则将影响培养基的质量(改变培养基成分或 pH) 。配制好的激素要常温避光保存,尽快使用(尽量不超过一个月)。将激素母液保存在 4 冰箱中, 希望获得较长的保存时间。但事实上这种做法是不可取的,因为激素在低温环境中易析出沉淀,影响使用效果。                                                   

3 危险药品的使用与保管

尽管组织培养技术已经相当成熟,也很普及,但该技术并不安全。除注意灭菌锅、超净台等大型仪器的使用安全外 ,最重要的当属危险药品的使用与保管。原则上,MS培养基中任何一种药品都有一定的危险性。现只把最突出、最需要预防的药品注释如下。

( 1 ) NH4NO3、 KNO3 

此两种药品为易爆品,取用时一定要轻拿轻放,保存在阴凉处。另外,目前NH4NO3,的购买受到一定的限制,也可以考虑使用其他培养基,如N6B5培养基,无 NH4 NO3成分,亦为组织培养所常用。

(2) EDTA- Na2 、CoC12、 2,4-D 此三种药品为致癌物,配制时要带胶皮手套,或两层塑料手套。EDTA-Na为金属螯合剂,有一定的粘性;CoCl2能够导致基因突变,遗传学实 验中也常用其作为致突变剂;2,4 - D是高效农药,对人的皮肤有伤害作用。

4 热水定容原则

在母液、激素、蔗糖、琼脂都加入后,很多人习惯用微波炉或电磁炉加热溶解培养基(特别是琼脂) 。培养基熔化后,由于水分的蒸发,会造成体积的减少,从而需要定容。这时一定要用热水(60左右) 进行定容,切忌用冷水(30以下),否则培养基中局部的琼脂将凝 固,造成营养成分浓度不均。 

5 关于调节 p H

适合的p H保证了营养成分的正常发挥,也决定了培养基的硬度(偏酸则过软,偏碱则过硬,都不利于组织的生长) ,故要十分留意。对于MS 培养基而言,只要各个成分按照用量精确加入,并且在熔化培养基时加热时间适合( 平均100 mL培养基加热6090s , 保证完全熔化的同时,尽量限制加热时间) ,则培养基的pH自然地将处于最适范围内。调解 pH时最好用电子pH计,以保证精确度。pH试纸的误差较大,要小心调节。可以将pH调到比最适值小一些,因为培养基在灭菌后,p H将变大。 

 

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