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空气、食品接触面微生物检验方法、检验标准



录入时间:2010-10-29 10:50:37 来源:青岛海博

1、  目的:
检测生产车间空气、操作人员手部、与食品有直接接触面的机械设备的微生物指标,生产区域环境当中病原微生物的监控,达到规定标准,以控制食品成品的质量。
2
、 参照标准:
中华人民共和国国家标准《一次性使用卫生用品卫生标准》GB159791995、《HACCP原理与实施》、中华人民共和国国家标准《公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定》GB/T 18204.12000、中华人民共和国进出口商品检验行业标准SN 0169-92/SN 0172-92/ SN 0170-92、 出入境检验检疫局二000四年《出入食品微生物检验培训教材》中《出入食品生产厂卫生细菌检验方法》、日本东京冷冻食品检验方法。
3
、 采样与检测方法:
3.1
空气的采样与测试方法
3.1.1
样品采集:
(1)
取样频率:
a)
车间转换不同卫生要求的产品时,在加工前进行采样,以便了解车间卫生清扫消毒情况。
b)
全厂统一放长假后,车间生产前,进行采样。
c)
产品检验结果超内控标准时,应及时对车间进行采样,如有检验不合格点,整改后再进行采样检验。
d)
实验性新产品,按客户规定频率采样检验。
e)
正常生产状态的采样,每周一次。
2)采样方法
在动态下进行,室内面积不超过30 m2,在对角线上设里、中、外三点,里、外点位置距墙1 m;室内面积超过30 m2,设东、西、南、北、中五点,周围4点距墙1 m。采样时,将含平板计数琼脂培养基的平板(直径9 cm)置采样点(约桌面高度),并避开空调、门窗等空气流通处,打开平皿盖,使平板在空气中暴露5 min。采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测,送检时间不得超过6h,若样品保存于04条件时,送检时间不得超过24h。
3.1.2
菌落培养:
1)在采样前将准备好的平板计数琼脂培养基平板置37±1 培养24 h,取出检查有无污染,将污染培养基剔除。
2)将已采集样品的培养基在6 h内送实验室,细菌总数于37±1培养48h观察结果,计数平板上细菌菌落数。
3)菌落计算:
a)
记录平均菌落数,用/来报告结果。用肉眼直接计数,标记或在菌落计数器上点计,然后用510倍放大镜检查,不可遗漏。
b)
若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠,可分辨时仍以2 个或2个以上菌落计数。
3.2
工作台(机械器具)表面与工人手表面采样与测试方法:
3.2.1
样品采集:
(1)
取样频率:
a)
车间转换不同卫生要求的产品时,在加工前进行擦拭检验,以便了解车间卫生清扫消毒情况。
b)
全厂统一放长假后,车间生产前,进行全面擦拭检验。
c)
产品检验结果超内控标准时,应及时对车间可疑处进行擦拭,如有检验不合格点,整改后再进行擦拭检验。
d)
实验新产品,按客户规定擦拭频率擦拭检验。
e)
对工作表面消毒产生怀疑时,进行擦拭检验。
f)
正常生产状态的擦拭,每周一次。
2 采样方法:
a)
工作台(机械器具):用浸有灭菌生理盐水的棉签在被检物体表面(取与食品直接接触或有一定影响的表面)取25cm2 的面积,在其内涂抹10次,然后剪去手接触部分棉棒,将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内送检。
b)
工人手:被检人五指并拢,用浸湿生理盐水的棉签在右手指曲面,从指尖到指端来回涂擦10次,然后剪去手接触部分棉棒,将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内送检。
3)采样注意事项:
擦拭时棉签要随时转动,保证擦拭的准确性。对每个擦拭点应详细记录所在分场的具体位置、擦拭时间及所擦拭环节的消毒时间
3.2.2
细菌大肠菌群的检测培养:
样液稀释:将放有棉棒的试管充分振摇。此液为1:10稀释液。如污染严重,可十倍递增稀释,吸取1ml 1:10样液加9ml无菌生理盐水中,混匀,此液为1:100稀释液。
3.2.2.1
细菌总数:
1)以无菌操作,选择12个稀释度各取1ml样液分别注入到无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿(平行样),将已融化冷至45左右的平板计数琼脂培养基倾入平皿,每皿约15ml,充分混合。
2)待琼脂凝固后,将平皿翻转,置36±1 培养48 h后计数。
3)结果报告:报告每25cm2食品接触面中或每只手的菌落数
3.2.2.2
大肠菌群:
1)平板法:
a)
以无菌操作,选择12个稀释度各取1ml样液分别注入到无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿(平行样),将已融化冷至45左右的去氧胆酸盐琼脂培养基倾入平皿,每皿约15ml,充分混合。待琼脂凝固后,再覆盖一层培养基,约3-5 ml。
b)
待琼脂凝固后,将平皿翻转,置36±1 培养24h后计数。
c)
结果计算: 以平板上出现紫红色菌落的个数乘以稀释倍数得出。
d)
结果报告:报告每25cm2食品接触面中或每只手的菌落数
2)试管法:
a)
以无菌操作,选择3个稀释度各取1ml样液分别接种到BGLB肉汤培养基中,每个稀释度接种三管。
b)
BGLB肉汤管于36±1培养48±2h。记录所有BGLB肉汤管的产气管数。
c)
结果报告:按BGLB肉汤管产气管数,查MPN表报告每25cm2食品接触面中或每只手的大肠菌群值。
3.2.3
金黄色葡萄球菌检测
1)定性检测
a)  
1ml 稀释液注入灭菌的平皿内,倾注15-20mlB-P培养基,(或是吸取0.1稀释液,用L棒涂布于表面干燥的B-P琼脂平板),放进36±1的恒温箱内培养48±2小时。
b)
从每个平板上至少挑取1个可疑金黄色葡萄球菌的菌落作血浆凝固酶实验。
c)  
结果报告:B-P琼脂平板的可疑菌落作血浆凝固酶实验为阳性,即报告手(工器具)上有金黄色葡萄球菌存在。
2)定量检测
a)  
以无菌操作,选择3个稀释度各取1ml样液分别接种到含10﹪氯化钠胰蛋白胨大豆肉汤培养基中,每个稀释度接种三管。
b)  
置肉汤管于36±1的恒温箱内培养48小时。划线接种于表面干燥的B-P琼脂平板,置36±1 培养4548小时。
c)  
B-P琼脂平板上,挑取典型或可疑金黄色葡萄球菌菌落接种肉汤培养基,36±1培养2024小时。
d)  
取肉汤培养物做血浆凝固酶试验,记录试验结果。
e)  
报告结果:根据凝固酶试验结果,查MPN表报告每25 cm2食品接触面中或每只手的金黄色葡萄球菌值。
3.3
工厂环境中病原体的检测计划与方法
检测计划:为了保证食品安全,工厂应该对生产环境中的病原微生物进行检测和评估,检测项目包括李斯特菌,沙门氏菌等病原体微生物,化验室应该按照一定的计划对生产场所环境中的病原体进行检测,其中包括地面、下水道、 排水沟、墙壁、天花板、设备框架、运输的支架,冷藏装置、速冻机、传送带、设备的螺丝、维修工具等部位。当某个点检测到病员微生物时,应该对环境中的相似点加大检测频率;在把所有的预定点检测完后,应该对环境中的病原微生物的存在状况进行全面评估,在下一次环境检测循环过程中加强检测容易出现病原体的环境点,达到持续改进的目的。
检测频率: 每月两次,每次每个区域至少选取5个检测点,分别进行检测。
3.3.1
环境李斯特菌的检测方法(3MTM  PetrifilmTM 环境李斯特菌的测试片)
3.3.1.1
用涂抹棒,海绵或者其他采样设备收集环境样本。
3.3.1.2
将收集的样本添加10毫升灭菌的缓冲蛋白胨水,将样本与缓冲蛋白胨混合1分钟,将样品置于室温(20-301小时,最久不超过1.5小时,以修复损伤的李斯特菌。
3.3.1.3
将测试片放在平坦处,掀起上层膜。
3.3.1.4
用移液器垂直滴加3毫升样品到下层膜中央,将上层膜缓慢盖下,以免产生气泡。
3.3.1.5
轻轻将塑料压板放在位于接种区上层膜上,不要压,扭转或者滑动压板。提起压板等至少十分钟,以使胶体凝固。
3.3.1.6
将测试片透明面朝上,可叠放至十片,在37±1培养26-30小时,可以用标准菌落记数器或者其他光学放大器判读,不要记数圆形轮廓上的菌落,因为他们不受选择性培养基的影响。
3.3.1.7
对于定性检测,根据紫红色菌落是否存在,结果记为检出或者未检出。
3.3.2
环境中沙门氏菌的检测方法
3.3.2.1
采样地点: 选取采样点时因尽量选取微生物容易滋生的地方
冷冻车间        FD车间
东区初加工        传递窗口表面、排水沟、
排水沟出口、墙壁、地面        卸料间        墙壁、墙角、地面、天花板、
物料车表面
东区精加工        地面、墙壁、墙角、排水沟、
排水沟出口、速动机链条、天花板        暂存间        墙壁、地面、天花板、墙角、墙缝
西区初加工        传递窗口表面、地面、墙壁、
排水沟、排水沟出口        挑选间        墙壁、地面、天花板、墙角、垫板
西区精加工        地面、墙壁、墙角、排水沟、排水沟出口、速动机链条、天花板        包装室        墙壁、地面、天花板、金探传送带表面、落地料存放处
3.3.2.2
操作步骤
3.3.2.2.1
采样应在生产开始后进行,用已浸润过的棉拭在选定的被测表面旋转涂抹约100cm2的面积,然后将棉拭放回涂抹试管并盖紧。         
3.3.2.2.2
将样品带回实验室,每5个点混合成一个样品, 登记编号,按照SN0170-92标准及时检测,若有阳性结果出现,应逐步对所混合的每个点分别检测。

 

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