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细菌总数的测定片操作方法



录入时间:2010-10-18 9:59:01 来源:互联网

一、测试细菌总数  二、测试乳酸菌

[贮藏]

1、未开封时,冷藏于8℃46℉),并在保存期内用完,高温度时,凝固水可以排除,包装物最好于室温启开。 
2
、已开封的,将封口以胶带封紧。 
3
、保存再封的袋于25℃77℉)和温度<50%,不要冷藏已开启的包装袋,并于一个月内使用完。  
        
[
样品制备]        
     
4
、制备1:10和更大稀释的食物样品稀释液,0称取或吸取食物样品,置入适宜的无菌容器内,如均质袋、稀释瓶、WhirlPak bag或者其他灭菌容器内
5
、加入适量的无菌稀释液,包括Buffered peptone Buffer(IDF phopsphate buffer ,0.0425g/LKH2PO4PH7.2) 、0.1%的蛋白胶水(ISO方法6887) 、缓冲蛋白胶水(ISO方法6579) 、盐溶液(0.85-0.90%)、bisulfite-free letheen broth或蒸馏水. 不可使用含有枸橼酸盐、酸性亚硫酸盐或硫代硫酸盐的缓冲液. 因为它们能抑止菌生长。 
6
、搅拌或均质样品。
   
样品的稀释液调PH6.57.2
   
对酸性样品的稀释液用IN NaOH
   
对碱性样品用IN HCLPH
 
 [
接种]        
     
7
、将测试片置于平坦表面处,揭开上层膜。 
8
、使用吸管将1mL样液垂直滴加在测试片的中央处。 
9
、允许使用上层膜直接落下,切勿向下滚动上层膜。  
 10
、使用压板隆起面底朝下,放置在上层膜中央处。 
11
、轻轻的压下,使样液均匀覆盖于圆形的培养面积上,切勿扭转压板。 
12
、拿起压板,静置至少1分钟以使培养基凝固。  
        
[
培养-解释]     
     
13
、测试片的透明面朝上,可堆叠至20片,对有一定湿度养箱能保持最少份损失是需要的。 
14
、可目视及用标准菌落计数器或其它的照明放大镜计数,并可参考 判读卡计算菌落数。 
15
、可以分离菌落作进一步鉴定,即掀起上层膜,由培养胶上挑取单个菌落。

MRS的操作步骤 :
[样品准备]        
     
1
、按说明书要求的2倍用量制备2×MRS肉汤。例如:如果说明书要求1L水中加入55gMRS,2×MRS则为1L水中加入110gMRS. 
2
、用标准稀释液制备1:10样品稀释液,该样品稀释液可用于检测其他微生物。 
3
、用1mL 3M电子加样器将1:10样品稀释液做1:2稀释。先取0.5mL2×MRS肉汤,然后再吸取0.5mL 1:10样品稀释液,混匀后即可获得含单倍 MRS1:20样品稀释液。  
4
、接种:在PAC检测片上接种1mL 1:20样品稀释液(0.5mL 1:10标准稀释液+0.5mL 2×MRS肉汤=1:20含单倍MRS的样品稀释液)。 
5
、培养:厌氧培养测试片。将检测片透明膜一面朝上放入厌氧罐中,叠放数量不得超过20片。如果检测片超过20片,可在同一罐中用一个坚硬的分隔器将检测片分开培养。将厌氧罐放入30℃35℃86℃95℉)培养箱中培养483h. 
6
、判读:PAC测试片可在标准菌落计数器或其他放大光源下计数。测试片赏的菌落数×稀释倍数(20)即为每毫升样品中酸乳菌数。详见 判读手册。

*MRS肉汤的操作程序 
1
、  按说明书要求的4倍用量制备4*MRS肉汤 
2
、  用标准稀释液制备1:10样品稀释液(11g/99mL25g/225mL)。取8mL供其它种类的微生物检测用。 
3
、  4*MRS肉汤加入1:10标准样品稀释液中,将获得含0.5 MRS的样品稀释液。 
   *
如果稀释液中含有11g样品、99mL标准稀释液,接种其它微生物测试片后,再加入18mL 4*MRS肉汤。
PAC
测试片上生长的菌落数乘以11即为最终结果(个/g)。 
*
如果稀释液中含有25g样品、255mL标准稀释液,接种其它微生物检测片后,再加入41mL 4*MRS肉汤。
PAC
测试片上生长的菌落数乘以11即为最终结果(个/g)。

乳酸菌检测方法 
[
样品准备]       
     
1
、制备至少1:10或更高稀释度的样品稀释液。称量食品样品于WirPak取样袋、均质袋、稀释瓶或其它适合的消容器中。 
2
、加入适当的肉汤稀释液,稀释液的配置方法根据说明书制备。如果使用一种1:10稀释液检测多种微生物,
3
、如果需要进行多倍稀释,肉汤稀释液只能用于最终稀释步骤。初始稀释可使用标准稀释液,包括磷酸盐缓冲液(IDF磷酸盐缓冲液,0.0425g/L KH2POI4 Ph7.2) 、0.1%蛋白胶水,蛋白胶盐稀释液(ISO方法6887)、蛋白胶水缓冲液(ISO方法6579)、生理盐水(0.850.90%),不含亚硫酸氢盐的 Letheen肉汤或蒸馏水,每步稀释都应充分混匀。  
4
、接种:按操作说明接种1.0mL样品稀释液于Petrifilm. 
5
、培养:厌氧培养测试片。将测试片透明面朝上放入GASPak厌氧罐中,叠放数量不得超过20片。如果检测片超过20片,可在同一罐中用一个坚硬的分隔器将检测片分开培养。将厌氧罐放入30℃35℃86℉95℉)培养箱中培养48±3h. 
6
、判读:Petrifilm: PAC测试片可在标准菌落计数器或其他放大光源下计数。测试片赏的菌落数乘以稀释倍数,可获得每毫升样品中酸乳菌

 

 

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