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仙人掌杆菌的检测



录入时间:2010-10-11 8:38:52 来源:互联网

 

一﹑简介与意义:

      仙人掌杆菌(又称腊肠杆菌),此类细菌分布极广,常污染实验室之检体,且革兰氏染色结果时有变异,故易与革兰氏阴性杆菌混淆,幸好因为它有产孢现象,可藉此加以区分。此类微生物在各类食品皆可分离,当此菌在食品中达10 个菌数,即可能发生食物中毒现象,其所引发的中毒现象可分成两种型式,一为呕吐型,主要系B.cereus产生毒素所致,属毒素型,潜伏期短,约1-5小时,症状似Staphylococcus aureus引起之肠胃道症状;另一是腹泻型,与B.cereus产生肠毒素有关,这种案例在某些地区时常发生,潜伏期4-16小时。此菌为G(+),好气性,长杆菌,主要存在土壤中,容易经由土壤﹑水污染生菜﹑米,进而交叉污染到其它食品,生食到上述污染食品时,即会发生食品中毒,因此菌产孢,较为耐热,如果食品经煮熟后,每每有少数孢子残存,倘若又未迅速冷却,致使孢子易萌芽,进而造成食物中毒,过去曾有多起案件,所以预防此类微生物引发的食物中毒,食物之保藏是相当的重要。

二﹑原理:

()分离与筛选:利用MYPKG平板培养来分离菌落,并利用B.cereus在此两种平板产生典型菌落,来完成计数与分离。

1.MYP agar(Mannitol-Egg yolk-Polymyxin agar):筛选:利用多黏菌素Polymyxin抑制杂菌。分离:利用

   B.cereus分解蛋黄(egg yolk),使菌落呈现混浊现象,并藉B.cereus不能发酵这种培养基唯一的糖类

  (Mannitol),因此这种菌菌落不会有黄色出现(酚红在酸性下会变成黄色,原来为红色)。

2.TSB agar:原理同MYP agar,但缺少Mannitol,因此少了一种可筛选的特征。

(二)生化试验:

1.触酶试验(Catalase test):此菌具有Catalase,可分解3% H2O2产生气泡现象。

2.嫌气下利用葡萄糖:此菌可在嫌气下发酵葡萄糖,可使覆盖石蜡之酚红葡陶糖培养基变成黄色

3.硝酸盐还原性(Reduction of nitrate):此菌具有此还原性,可将硝酸盐nitrate (NO3)还原成亚硝酸盐nitaite (NO2),当加入指示剂时,NO2可与指示剂反应产生红色现象。

4.石蕊牛乳试验(Litmus milk test):此菌具有蛋白质分解酵素(Protease),可将脱脂乳(Skim milk)中蛋白质分解成蛋白冻peptone,而使培养基变成澄清现象。

5.明胶分解试验(Hydrolysis of gelatin):此菌可分解明胶,可将培养此菌的明胶培养基放在4-10℃冰箱中,30分钟后,明胶会有不凝固现象。

6.淀粉分解试验(Hydrolysis of starch):此菌可水解淀粉,所以将碘试剂加入淀粉培养基(Starch agar)中,此菌菌落周围会出现透明圈,系因该区淀粉已被水解。

7.V-P test:此菌V-P反应呈现(-)。

8.溶血试验:此菌具有溶血作用,可使血液培养基(Blood agar)平板之菌落出现透明环。

9.酚红糖类试验:此菌不利用甘露糖醇(D-Mannitol),在含有此种糖类之培养基不会变色(红色),而此菌可利用蔗糖(Sucrose),水杨甘(Salicin),甘油(Glycerol),因此含有这三种糖类的培养基会呈酸性(黄色),但不产气。

三﹑使用药品﹑样品与培养基

(一)培养基

1.甘露糖醇-蛋黄-多黏杆菌素(洋菜)培养基(Mannitol-Egg yolk-Polymyxin agar,简称MYP agar)

牛肉抽出物(Beef extract) 1g 蛋白冻(Peptone)  10g

D-甘露糖醇(D-Mannitol) 10g  氯化钠(NaCl) 10g

酚红(Phenol red) 0.025g 洋菜(Agar) 15g

蒸馏水(Distilled water) 900ml  

加热溶解后,以121℃灭菌15分钟,最后pH值为6.8±0.2,冷却至50℃,加入50ml无菌之蛋黄液(a)及每ml含1万单位的多黏杆菌素B硫酸盐(Polymyxin B sulfate)溶液10ml(b)。培养基注入培养皿前,应摇动混合,使絮状沉淀物分散均匀,摇动时应避免产生气泡。

(a)蛋黄液之配制:鸡蛋洗净,浸入0.1%氯化汞溶液1小时,再浸入70%乙醇溶液中30分钟,取出蛋黄加入等量

    之无菌生理食盐水。

(b)ml1万单位多黏杆菌素B硫酸盐溶液之配制:50万单位多黏杆菌素B硫酸盐,溶于33.3ml蒸馏水后,

    再以具有0.45um孔径滤膜做无菌过滤。

      2.胰化酪蛋白-大豆-多黏杆菌素培养液(Trypticase-Soy-Polymyxin Broth,简称TSB):同葡萄状球菌实验

      3.营养洋菜培养基(Nutrient agar):同E.coli实验

      4.营养培养基(Nutrient broth):同E.coli实验

      5.酚红葡萄糖培养液(Phenol red glucose broth):同金黄色葡萄状球菌实验

      6.硝酸盐培养基(Nitrate broth)

(二)药品:

     1.亚硝酸盐试验:

A solution:1g对-胺基苯璜酸(Sulfonilic acid)溶于125ml之 5N 醋酸(acetic acid)中。

      B solution:1g α-柰酚(α-naphthol)溶于200ml5N 醋酸(acetic acid)中。

     2.碘试剂:1g KI溶于5ml蒸馏水;0.5gI2完全溶解后再加蒸馏水成100ml。

 

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