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大肠杆菌在增菌培养基中的生长实验



录入时间:2010-9-25 11:15:09 来源:中国现代药学应用杂志

摘要
目的     观察大肠杆菌在增菌培养基中繁殖的差异。
 
方法     通过不同来源大肠杆菌在三种增菌培养基中繁殖菌落数的,及在固体培养基中菌落大小的比较和对数生长实验,比较大肠杆菌在不同培养液中繁殖的差异。
 
结果     大肠杆菌在硫乙醇酸盐液体培养基中繁殖的速度最快,营养肉汤其次,胆盐乳糖增菌液最慢。
 
结论     大肠杆菌在营养肉汤、硫乙醇酸盐液体培养基、 胆盐乳糖增菌培养基中,培养8h的菌落数,存在显著差异( t测验,χ2测验) 。
 
    中国药典2000年版规定,检测大肠杆菌的增菌培养基采用胆盐乳糖,是因为胆盐能抑制革兰阳性细菌的生长,乳糖有利于肠道杆菌的生长,提高阳性菌的检出率。大肠杆菌在不同增菌液中的生长、繁殖的速度存在显著差异。
1 实验材料
1.1 培养基
    胆盐乳糖增菌液( BL ),批号980521 ; 硫乙醇酸盐液体培养基( FT ),批981216;营养肉汤( MH ),批号980607 ;三种培养液琼脂培养基,在其液体培养基中加入2%琼脂; 伊红美蓝琼脂培养基,批号980626 ;均购于中国药品生物制品检定所。
1.2 菌种
    大肠杆菌[CMCCB 44102,大44102]由中国药品生物制品检定所提供; 大1,大2由食品中分离; 大3,大4由大鼠粪便中分离,大5,大6由药品中分离。均在EMB平板上为紫黑色、圆形、凸起、光滑湿润,有金属光泽。均发酵乳糖,产酸,产气、IMViC 为+ + - - , 大44102、大1、大2、大3及大4 的MUG荧光强度为(+ + +) , 大5 为弱荧光( + + ) , 大6 无荧光。
2 实验方法与结果
2 . 1 菌悬液制备
取各大肠杆菌斜面上的菌苔—白金耳,分别接种于9mL营养肉汤培养基中,培养18h, 用生理盐水稀释成每1mL含50-1000CFU。
2 . 2 菌落数的比较实验
取50-100CFU的菌悬液,分别加入10ML的三种增菌液中。于37℃培养8h,用生理盐水稀释成1:100,分取0.1 mL用L棒涂于EMB培养基上,于37℃培养18h,计数。结果见表1 。
大肠杆菌在三种增菌液中8h菌落数的比较实验
菌种
BL
MH
FT
44102
140±17
154±19
176±23*
1
171±26
198±25
206±27
2
182±22
184±30
210±35*
3
110±19
141±21*
196±26**
4
137±9
182±12*
196±18*
5
46±8
80±13
94±26*
6
78±15
131±16**
208±23**
注:数据为10个平皿菌落数的平均值与BL组比较,*P<0.05,**P<0.01
 
2 . 3 菌落大小的比较实验
取50-1000CFU菌悬液0.1mL 用L 棒涂于三种增菌液琼脂培养基上,于37℃培养18h, 测量菌落直径。结果见表2。
表2 大肠杆菌在三种增菌液的固体培养基中菌落大小的比较实验(mm)
菌种
BL
MH
FT
44102
1.7±0.2
1.9±0.3
2.2±0.6
1
1.9±0.3
1.6±0.4
2.2±0.5
2
1.7±0.2
1.6±0.4
2.0±0.7
3
1.6±0.2
1.7±0.6
2.1±0.4*
4
1.3±0.4
1.8±0.5*
2.4±0.5*
5
1.7±0.5
1.7±0.3
2.0±0.6
6
1.4±0.3
1.8±0.4*
2.1±0.5**
注:数据为10个菌落直径(mm)的平均值,与BL组比较,*P<0.05,**P<0.01
 
 
 
 
2 . 4 对数生长实验
取50-1000CFU菌悬液分别加人10mL的三种增菌液中,于37℃培养6, 12 , 18 h,稀释成适宜浓度,取0.1mL用L棒涂于三种增菌液琼脂培养基上,于37℃培养18h,计数。取常用对数。结果见表3。
表3 大肠杆菌在三种增菌液中的对数生长实验
菌种
BL
MH
FT
6
12
18
6
12
18
6
12
18
44102
7.24±2.13
8.25±3.14
9.34±3.45
7.19±2.56
8.21±2.02
9.40±3.22
7.24±2.30
8.64±2.89
9.66±3.24
1
7.24±1.89
8.30±2.98
9.21±3.41
7.30±2.55
8.36±2.65
9.32±2.96
7.31±2.12
8.56±2.46
9.41±2.99
2
7.26±2.01
8.21±3.05
9.32±3.22
7.28±2.16
8.30±2.44
9.21±3.33
7.32±2.56
8.54±2.38
9.53±3.24
3
7.26±2.11
8.12±2.67
9.30±2.98
7.15±2.47
8.21±2.61
9.35±3.26
7.29±2.46
8.39±2.42
9.47±3.64
4
7.25±1.89
7.35±2.77
9.45±3.01
6.91±2.61
7.96±2.34
9.04±3.24
7.10±2.03*
8.35±2.65
9.58±3.58
5
6.66±2.12
7.69±2.87
8.27±2.96
6.90±2.63
8.06±2.18*
9.31±3.01**
7.20±2.43
8.26±2.37
9.46±2.56**
6
6.89±2.54
7.56±3.21
8.65±3.45
7.12±2.34
8.26±2.03*
9.10±2.96*
7.32±2.19
8.22±2.06*
9.35±3.07**
 
注:数据为10个平皿菌落数的平均值,与BL组比较,*P<0.05,**P<0.01
 
3 讨论
    通过对不同来源大肠杆菌在三种增菌培养基中培养8h的菌落数、菌落大小和生长速度进行了对比实验,采用t 测验,比较MH 、FT与BL增菌培养基对同一株大肠杆菌生长影响的差异程度; 采用χ2测验, 比较MH , FT与BL增菌培养基对大肠杆菌生长影响的差异程度。结果,大肠杆菌在MH , FT与BL增菌培养基中培养8h 的菌落数,存在显著差异( t测验,P <0.05 或P < 0.01;χ2测验, 样本χ22(1 0.05,样本χ22(10. 01 )。大肠杆菌在FT固体培养基中菌落大小与BL固体培养基比较,存在显著差异(χ2测验,样本χ22(10.05 )。药品中污染的大肠杆菌因受到原料的处理、干燥、加温等加工过程的影响, 存活的细菌受到不同程度的损伤,对于合成生产或半合成生产的药品,污染肠道杆菌的几率小, 由于胆盐乳糖增菌液中含有选择性抑菌成分,往往不易获得阳性结果,将样品接种无选择性的增菌培养基中,如MH和FT,进行培养,使受损伤的细菌得以恢复,少量污染菌也能迅速增殖。在口服制剂大肠杆菌检验中应合理选择培养液。

 

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