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植物组培经典培养基



录入时间:2010-9-13 14:02:02 来源:青岛海博

培养基
培养基是植物组织培养的重要基质。在离体培养条件下,不同种植物的组织对营养有不同的要求,甚至同一种植物不同部位的组织对营养的要求也不相同,只有满足了它们各自的特殊要求,它们才能很好地生长。因此,没有一种培养基能够适合一切类型的植物组织或器官,在建立一项新的培养系统时,首先必须找到一合适的培养基,培养才有可能成功。
 
主要培养基配方
培养基的配置
 
 
主要培养基配方:
1.  CC (mg/L)
大量元素
含量
微量元素
含量
铁盐
含量
有机物
含量
其他
含量
KNO3
60.6
H3BO3
0.0155
FeSO4·7H2O
27.8
肌醇
0.5
麦芽糖
20000
NH4NO3
32
MnSO4· 4H2O
0.0575
Na2EDTA·2H2O
37.3
烟酸
0.03
甘露醇
36430
MgSO4 7H2O
12.35
ZnSO4· 7H2O
0.0288
 
 
盐酸硫胺素
0.0425
蔗糖
30000
KH2PO4
6.8
Na2MoO4·2H2O
0.0012
 
 
盐酸吡哆醇
0.005
琼脂
8000
CaCl2 2H2O
29.4
CuSO4·5H2O
0.0000125
 
 
甘氨酸
0.01
 
 
 
 
CoCl2· 6H2O
0.0000119
 
 
 
 
 
 
 
2.  NB
大量元素
含量
微量元素
含量
铁盐
含量
有机物
含量
其他
含量
KNO3
141.5
H3BO3
0.015
FeSO47H2O
27.8
肌醇
0.5
谷氨酰胺
500
(NH4)2SO4
23.15
MnSO4 4H2O
0.05
Na2EDTA2H2O
37.3
烟酸
0.005
水解L蛋白
300
MgSO4 7H2O
9.25
ZnSO4 7H2O
0.01
 
 
盐酸硫胺素
0.05
脯氨酸
500
KH2PO4
20
Na2MoO4 2H2O
0.00125
 
 
盐酸吡哆醇
0.005
蔗糖
30000
CaCl2 2H2O
8.3
CuSO4 5H2O
0.0000125
 
 
 
 
琼脂
8000
 
 
CoCl2 6H2O
0.0000125
 
 
 
 
 
 
 
 
KI
0.00375
 
 
 
 
 
 
 
3.  N6
是1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养而设计的。其特点是成分较简单,KNO3和(NH4)2SO4含量高。在国内已广泛应用于小麦、水稻及其他植物的花药培养和其他组织培养。
 
大量元素
含量
微量元素
含量
铁盐
含量
有机物
含量
其他
含量
KNO3
2830
H3BO3
1.6
FeSO47H2O
27.8
烟酸
0. 5
蔗糖
30000
(NH4)2SO4
463
MnSO4 4H2O
4.4
Na2EDTA2H2O
37.3
盐酸硫胺素
1
琼脂
8000
MgSO4 7H2O
185
ZnSO4 7H2O
1.5
 
 
盐酸吡哆醇
0.5
 
 
KH2PO4
400
KI
0.8
 
 
甘氨酸
2
 
 
CaCl2 2H2O
166
 
 
 
 
 
 
        
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
4.  MS
是1962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。特点是无机盐和离子浓度较高,为较稳定的平衡溶液。其养分的数量和比例较合适,可满足植物的营养和生理需要。它的硝酸盐含量较其他培养基为高,广泛地用于植物的器官、花药、细胞和原生质体培养,效果良好。有些培养基是由它演变而来的。
 
大量元素
含量
微量元素
含量
铁盐
含量
有机物
含量
其他
含量
KNO3
1900
H3BO3
6.2
FeSO47H2O
27.8
肌醇
100
蔗糖
30000
NH4NO3
1650
MnSO4 4H2O
22.3
Na2EDTA2H2O
37.3
烟酸
0.5
琼脂
8000
MgSO4 7H2O
370
ZnSO4 7H2O
8.6
 
 
盐酸硫胺素
0.5
        
 
KH2PO4
170
Na2MoO4 2H2O
0.25
 
 
盐酸吡哆醇
0.5
 
 
CaCl2 2H2O
440
CuSO4 5H2O
0.025
 
 
甘氨酸
2
 
 
 
 
CoCl2 6H2O
0.025
 
 
 
 
 
 
 
 
KI
0.83
 
 
 
 
 
 
 
5.  MSM
大量元素
含量
微量元素
含量
铁盐
含量
有机物
含量
其他
含量
KNO3
1900
H3BO3
6.2
FeSO47H2O
27.8
尼克酸
4.5
水解L蛋白
2000
NH4NO3
1650
MnSO4 4H2O
22.3
Na2EDTA2H2O
37.3
盐酸硫胺素
9.9
蔗糖
30000
MgSO4 7H2O
370
ZnSO4 7H2O
8.6
 
 
盐酸吡哆醇
9.5
琼脂
8000
KH2PO4
170
Na2MoO4 2H2O
0.25
 
 
 
 
 
 
CaCl2 2H2O
440
CuSO4 5H2O
0.025
 
 
 
 
 
 
 
 
CoCl2 6H2O
0.025
 
 
 
 
 
 
 
6.改良怀特培养基
是1943年由White为培养番茄根尖而设计的。1963年又作了改良,称作White改良培养基,提高了MsSO4的浓度和增加了硼素。其特点是无机机盐数量较低,适于生根培养。
 
大量元素
含量
微量元素
含量
铁盐
含量
有机物
含量
其他
含量
KNO3
80
H3BO3
1.5
Fe2(SO4)3
2.5
肌醇
100
蔗糖
30000
Ca(NO3)2 4H2O
300
MnSO4 4H2O
7.0
 
 
烟酸
0.3
琼脂
8000
MgSO4 7H2O
720
ZnSO4 7H2O
3.0
 
 
盐酸硫胺素
0.1
        
 
NaH2PO4 4H2O
16.5
MoO3
0.0001
 
 
盐酸吡哆辛
0.1
 
 
KCl
65
CuSO4 5H2O
0.001
 
 
甘氨酸
3
 
 
Na2SO4
200
 
 
 
 
 
 
 
 
 
培养基的配置
在植物组织培养工作中,配制培养基是日常必备的工作。为简便起见,通常先配制一系列母液,即贮备液。所谓母液是欲配制液的浓缩液,这样不但可以保证各物质成分的准确性及配制时的快速移取,而且还便于低温保藏。一般母液配成比所需浓度高10-100倍。母液配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。配制时注意一些离子之间易发生沉淀,如Ca2+和S042+,Ca2+、Mg2+和PO43- 一起溶解后,会产生沉淀,一定要充分溶解再放入母液中。配制母液时要用蒸馏水或重蒸馏水。药品应选取等级较高的化学纯或分析纯。药品的称量及定容都要准确。各种药品先以少量水让其充分溶解,然后依次混合。一般配成大量元素、微量元素、铁盐、维生素等母液,其中维生素、氨基酸类可以分别配制,也可以混在一起。母液配好后放人冰箱内低温保存,用时再按比例稀释。
 
母液的配制方法:
•单配法:将培养基配方中的各种成分分别配成一定浓度的母液。一般用a:b表示,即每b毫升溶液中含有a毫克溶质。
•混配法:将几类营养成分按配方中的用量扩大一定倍数称量,分别溶解后每一类混合在一起定容到一定体积配成混合母液,浓度可用a mg/L表示,即配制一升培养基吸取该母液a ml.
•生长素配制时可先用少量95%酒精助溶。2,4—D可用0.1mol/L的NaOH或KOH助溶,加入温水定容。生长素常配成1mg/ml的溶液贮于冰箱中备用。
•细胞分裂素类一般先用少量1N盐配溶解后,再加入温水冷却后定容,
•铁盐配法(MS为例):在装有400ml  蒸馏水的烧杯中加入2粒苛性钠,溶解后加入3.73g EDTA-Na2,加热使其全部溶解,然后边搅拌边慢慢加入2.78g FeSO4.7H2O直至全部溶解,冷却后定容至500ml,置于冰箱中备用。

 

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