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《水生微生物实验法》——不同类型微生物的分离方法(9)



录入时间:2010-9-9 17:18:43 来源:青岛海博

 

(九)磷细菌的分离

磷细菌是将海水、淡水和土壤中的无效磷转化为有效磷的细菌并可分为两个类型.一是促使含磷有机物分解,释放出能被动物利用的磷.即有效磷,称为有机磷细菌.另一类是能促使不溶性无机磷转化为可溶性磷的细菌,称为无机磷细菌,此类细菌能产生具有溶解不溶性磷酸钙的酸性物质。

1 .有机磷细菌的分离

1)平板培养基制备:

① 蒙金娜基础培养基成分及制法

葡萄糖     10.0

( NH42SO4   0.5

MgSO4·7H2O    0.3

NaCl 0.3

KCl   0.3

FeSO4·7H2O    0.036 (0.5%溶液6 毫升)

MnSO4 0.03 (0.5%溶液6 毫升)

CaCO3   5

琼脂    18-20

将这些成分溶于蒸馏水中,加热溶化,混匀,加至1000毫升后分装于150 毫升锥形瓶中、包装好,于121 蒸气下灭菌20-30 分钟,备用。

② 卵黄稀释液制法:本液须在制平板前临时制备.用酒精擦净新鲜鸡蛋外壳,用解剖刀切破鸡蛋两端,流去蛋清后将蛋黄流入已灭菌的锥形瓶中,约加等量的无菌水)摇匀即成。

③ 将蒙金娜基础培养基融化,冷至50 后,立即再加入卵黄液,每12-15 毫升的基础培养基加卵黄稀释液1 毫升作为有机磷源,混匀后分装于培养皿内凝成平板.

2)各取两个不同站位的海粘泥和河口粘泥各5 ,分别溶于装有45 毫升无菌水及若干玻璃球的锥形瓶内,摇匀,各取上清液l 毫升分别注入装有9毫升无菌水的试管中,即冲稀10 倍。

3)用接种环取1 环悬液接种于平板培养基上,用曲-玻棒涂匀,每种悬液接种2 个平板(即每种样品作4 个平板), 颠倒8 个平板在25-30 下培养1-2 天,

4)观察菌落形态,由于有机磷细菌能分解卵黄中的有机磷产生磷酸,故在其菌落的周围可形成一个碳酸钙溶解区。若未得到纯菌落,则挑选菌苔少许,用稀释液在平板培养基上分离,直到纯化后,再移接到牛肉膏蛋白胨培养基(牛肉膏3 ,蛋白胨5 ,琼脂15 ,水1000 毫升。pH7.2-7.4)斜面上保存.

2 .无机磷细菌的分离

(1)分离培养基的制备:用2 的磷酸钙代替蒙金娜基础培养基中的碳酸钙成分即可配成。

(2)取样、接种、培养均按上述有机磷细菌的方法进行,

(3)观察菌落的形态:因为有磷酸钙粉末的存在,制成的培养基不透明,因而接种后若能使磷酸钙溶解的细菌,在其菌落周围就会出现透明区.据此可知分离的细菌为无机磷细菌,可挑取其菌落作为纯化培养,纯化后接种斜面培养基上保存。

 

 

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