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《水生微生物实验法》——不同类型微生物的分离方法(6)



录入时间:2010-9-9 15:59:37 来源:青岛海博

 

(六)反硝化细菌的富集培养与分离

反硝化细菌的种类很多。它们主要属于革兰氏染色负反应,不生芽孢的杆菌,并都属兼、嫌气性细菌,在通气不良的情况下,可完全利用硝酸盐或亚硝酸盐中的氧来氧化所需的有机物。即对硝酸盐和亚硝酸盐起反硝化作用也就是对它们起还原作用。

1 .反硝化细菌富集培养

1)培养基成分及其制备:

KNO3    2

柠檬酸钠5

K2HPO4 1

KH2PO4 1

MgSO4·7H2O  0.2

陈海水(或蒸馏水)1000 毫升

将上面成分溶解于水,调pH 7.2-7.6,分装于试管或烧瓶.于121 蒸汽下灭菌20 分钟。

2)接种与结果观察:在装富集培养液的试管中分别加少量的海泥或池泥.河泥,在2025-30 下培养5-15 天或3-10天。若培养液变混浊,有气泡产生,说明有反硝化菌生长,或检验其有无氨和亚硝酸产生,则可判定是否有反硝化细菌生长.

2 .分离培养

1)分离培养基成分及制备.

葡萄糖1

酒石酸钾钠10

KNO3  2

K2HPO4   0.2

CaCl·2H2O   0.5

陈海水或蒸馏水1000毫升

将上述盐类溶于水中,调pH 7.4-7.6,装于烧瓶中,121 蒸汽下灭菌20 分钟.

2)接种与结果观察:

① 将上述培养液倾入硅酸胶平板上,于50 下烘烤至表面无水流动,不宜过干,以免破裂.

② 用富集培养物涂布接种于烘烤后的平板培养基上。

于适温厌氧条件下培养至长出足够大的菌落.

④ 观察菌落形态,作革兰氏染色,油镜下观察其反应及菌体形态.

⑤ 挑取菌落于液体培养基上培养,检验其培养基中有无硝酸盐(用二苯胺试剂检验)和亚硝酸盐(用锌--淀粉或格里斯试剂检查,见硝化细菌的富集与分离)存在,若硝酸根或亚硝酸根消失,可确定所分离细菌属反硝化细菌.

 

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