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微生物技术资料
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厌氧菌培养基



录入时间:2010-8-18 10:56:18 来源:青岛海博

一、液体培养基-石蕊牛乳培养基
[用途]
观察细菌对牛乳的凝固及发酵作用
[配法]
新鲜脱脂牛乳1L , 20g / L 石蕊水溶液10ml(16g / L 溴甲酚紫乙醇溶液lml)( pH6.8 )。
将新鲜牛乳隔水煮沸30min ,冷却后置4 ℃ 冰箱内过夜。用吸管吸出下层乳汁,注入另一烧瓶内,弃去上层乳脂。加入石蕊溶液,分装试管,灭菌113 ℃ 15min (或间歇灭菌)。置35℃ 培养24-48h ,若无细菌生长,即可4 ℃ 冷藏备用
[用法]
将被检菌接种于上述培养基中,若为芽胞梭菌,要在培养基内加入微量铁末,于35℃ 培养8-24h 必要时可延长至14 天。
[观察结果]
产酸   因发酵乳糖而产酸,使指示剂变为粉红色
产气   发酵乳糖同时产气,可冲开上面的凡士林
凝固   因产酸太多而使牛乳中的酪蛋白凝固
胨化   将凝固的酪蛋白继续水解为胨,培养基上层液体变清,底部可留有未被完全胨化的酪蛋白
产碱   乳糖不发酵,因分解含氮物质,生成胺及氨,培养基变碱,指示剂变为蓝色
不变   乳糖不发酵,指示剂无变化,与未接种管相同
白色   石蕊被还原成白色
 [质量控制]
粪产碱杆菌,碱性反应,培养基呈蓝色;变形杆菌,没有变化,培养基仍呈紫色;产气荚膜梭菌,急骤发酵,酸凝块被气体破坏
注:培养基在灭菌前加入凡士林,可观察厌氧菌对牛乳中乳糖分解清况。若全脂牛奶需行脱脂处理,该培养基pH6.8,呈紫色
二、疱肉培养基
[用途]
主要用于梭菌属的培养
[配方]
牛肉渣0.5g,牛肉浸液7ml(pH 7.6 )。
将干燥的肉渣0.5g装入15mm×150mm试管内,再加入pH7.6牛肉浸液7ml,两者高度比例为1:2 。
在试管液面上加一层3-4mm厚度的融化凡士林。用橡皮塞塞紧,经121 ℃ 灭菌15min 后,置4 ℃ 冰箱备。
[用法]
将各种采集的标本,在2h 内取0.5ml种入培养基底层,立即置35-37℃ 厌氧恒温箱内进行培养,2-7天观察结果。若发现培养基有混浊、沉淀、粘性菌膜生长现象,及培养物的臭味、肉渣的消化、变色、产气等清况,用以判断结果,并进行涂片染色镜检及分离培养。一般在培养48h 以后开始观察,直至3 周,无细菌生长,即可报告阴性
[质量控制]
破伤风杆菌或坏死梭杆菌48h 的培养物稀释1 000 倍,接种0.01 ml,生长良好
[保存]
置4 ℃ 冰箱内,数月有效
注:培养基的管口要密封,使用时将培养基置于水浴中煮沸10min ,以除去管内残存的氧。为提高培养效果,在底层可放少许铁粉作为还原剂
 

 

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