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L 型细菌培养基



录入时间:2010-8-18 10:51:30 来源:青岛海博

 

一、L 型细菌增菌培养基

(一)高渗液体L 型细菌菌增菌培养基

[用途]

可用作基础培养。也用于血液、骨髓、胸水等标本进行L 型细菌增菌培养

1 高渗盐液体增菌培养基

[配法]

新鲜牛肉500g ,蛋白胨10g ,氯化钠40g ,蒸馏水1L。

将新鲜牛肉去除脂肪、筋膜,切成小块后用绞肉机绞碎,称取500g 加水1L 混合后置冰箱浸抱过夜;将肉浸液煮沸30min ,然后用麻布或绒布挤压过滤;加入蛋白胨、氯化钠后加热溶解,并补足因蒸发而失去的水分,调整pH 7.4-7.6 ;用滤纸过滤后分装小瓶,121 灭菌15-20 min。

2 高渗糖液体增菌培养基

[用途]

用于血液、骨髓、胸水等标本的L 型细菌增菌培养

[配法]

新鲜牛肉500g ,蛋白胨10g ,氯化钠30g ,蔗糖150g ,蒸馏水1L 。

同上述高渗盐培养基,唯高压蒸汽灭菌时采用115 20min ,以免蔗糖分解>

[用法]

取血液5ml及其它标本直接种于高盐、高渗糖液体培养基,置35 培养1-7天,每天观察细菌生长清况在上述增菌培养基上,L 型细菌呈颗粒状生长,颗粒可粘附于管壁或沉淀于管底。

[质量控制]

金黄色葡萄球菌L 型生长良好

(二)L 型增菌培养基

[用途]

用于血液、脑脊液等体液标本中L 型细菌的增殖培养

[配法]

(1)牛肉浸液1L ,氯化钠30-40g ,蛋白胨(优质)20g

(2)   牛肉浸液1L ,氯化钠30g ,蔗糖150g ,蛋白胨20g

将各成分称量混合加热溶解后,校正pH 7.4-7.6 ,分装培养瓶,每瓶15ml,121 灭菌15min 备用。

[用法]

用无菌操作采集标本,立即接种于L 型细菌液体培养基和常规血液增菌培养基内,标本与培养基之比为1: 10 ,置35 培养3-7天,逐日观察。如发现培养液产生混浊、溶血、絮状沉淀或瓶壁上附有粘性颗粒等细菌生长现象,立即分离至L 型细菌分离平板上进行鉴定。

[质量控制]

L 型细菌做生长试验,培养24-72h ,生长良好。

[保存]

4 冰箱内使用1-2 周。

二、L 型细菌分离琼脂培养基

[用途]

用于常见L 型细菌的分离培养

1.    Kaqan 分离平板

[配法]

牛肉浸液800ml ,氯化钠50g,蛋白胨(Oxoid ) 20g ,琼脂粉(Oxoid8g ,血浆(人、马、羊)200ml 将前四种成分称量混合加热溶解,校正pH 7.5 0.1 ,分装每瓶80ml,121 灭菌15min 冷藏备用。

临用时加热溶解后,冷却至56 加入血浆20ml摇匀倾注平板。放在密封塑料袋中,置4 冰箱备用。

注:血浆要预先灭菌处理,并经56 水浴灭活30min。

2 蚌埠85-7分离平板

[配法]

牛肉浸液1L ,氯化钠40g ,蛋白胨30g ,明胶(生物试剂)30g ,琼脂粉5-8g 。

将上述成分混合,加热溶解,校正pH 7.4-7.6 ,分装后,经121 灭菌15 min 后倾注平板,置4 冰箱备用。

[用法]

将血、脑脊液、尿等标本或增菌培养物滴种于平板约0.1ml,用L 型玻棒均匀涂开,置35 温箱内启盖片刻,除去平板表面水分。在平板的边端贴一片专用诱导纸片。覆盖后置35 10 %二氧化碳环境下3-5 天逐日观察。如有可疑L 型菌落,用低倍镜检查。在诱导区与非诱导区同时见到L 型菌落说明标本内确有L 型细菌存在;若诱导区存在L 型菌落,而非诱导区无,则提示标本内有L 型细菌变异的趋向。

[质量控制]

(1)细菌诱导试验,在该平板上能诱导金黄色葡萄球菌Coweng I标准菌株出现L 型菌落和G 型菌落。

(2)   L 型菌落作10-7 稀释,取0.1ml接种,经培养获得单个菌落和纯培养。

[保存]

4 冰箱内,2 周用完

 

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