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微生物菌种常规保藏技术规程(4)



录入时间:2010-8-10 13:42:40 来源:青岛海博

附    录C
沙土管保藏法
 
C.1   适用范围
本方法适用于产孢类放线菌、芽孢杆菌、曲霉属、青霉属以及少数酵母如隐球酵母和红酵母等。不适用于病原性真菌的保藏,特别是不适于以菌丝发育为主的真菌的保藏。
C.2   原理
干燥条件下微生物菌种代谢活动减缓,繁殖速度受到抑制。此方法可减少菌株突变,延长存活时间。
C.3   方法与步骤
C.3.1   沙土管制备
将河沙用60目过筛,弃去大颗粒及杂质,再用80目过筛,去掉细沙。用吸铁石吸去铁质,放入容器中用10%盐酸浸泡,如河沙中有机物较多可用20%盐酸浸泡。24小时后倒去盐酸,用水洗泡数次至中性,将沙子烘干或晒干。另取瘦红土100目过筛,水洗至中性,烘干,按沙∶土=  2∶1混合。把混匀的沙土分装入安瓿管或小试管中,高度为1厘米左右。塞好棉塞,0.1MPa灭菌30分钟,或常压间歇灭菌3次,每天每次1小时。灭菌后在不同部位抽出若干管,分别加营养肉汁、麦芽汁、豆芽汁等培养基,经培养检查后无微生物生长方可使用。
C.3.2   斜面培养物的制备
参照附录A。
C.3.3   制备菌悬液
向培养好的斜面培养物中注入3mL-5mL无菌水,洗下细胞或孢子制成菌悬液。用无菌吸管吸取菌悬液,均匀滴入沙土管中,每管0.2mL -0.5mL。放线菌和霉菌可直接挑取孢子拌入沙土管中。
C.3.4   干燥
用真空泵抽去安瓿管中水分并放置于干燥器内。
C.3.5   纯培养检查
从做好的沙土管中,按10∶1比例抽查。无菌条件下用接种环取出少量沙土粒,接种于适宜的固体培养基上,培养后观察其生长情况和有无杂菌生长。如出现杂菌或菌落数很少,或根本不长,则须进一步抽样检查。
C.3.6   保藏
将纯培养检查合格的沙土管用火焰熔封管口。制好的沙土管存放于低温(4℃-15℃)干燥处,半年检查一次活力及杂菌情况。也可将纯培养检查合格的沙土管直接用牛皮纸或塑料纸包好,置干燥器内保存。用此方法保藏时间为2-10年不等。
C.3.7   复活
复活时在无菌条件下打开沙土管,取部分沙土粒于适宜的斜面培养基上,长出菌落后再转接一次,也可取沙土粒于适宜的液体培养基中,增殖培养后再转接斜面。

 

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