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微生物菌种常规保藏技术规程(3)



录入时间:2010-8-10 13:41:21 来源:青岛海博

附    录    B
液体石蜡保藏法
 
B.1   适用范围
本方法适用于不能分解液体石蜡的酵母菌、某些细菌(如芽孢杆菌属,醋酸杆菌属等)和某些丝状真菌(如青霉属,曲霉属等)。
B.2   原理
液体石蜡保藏法可作为定期移植保藏法的辅助方法。在液体石蜡覆盖下,菌种的生物代谢受到抑制,细胞老化被推迟。此方法可阻止氧气进入,使好气菌不能继续生长,也可防止因培养基的水分蒸发而引起的菌体死亡,达到延长菌种保藏时间的目的。
B.3   技术要求
B.3.1    菌种培养参照附录A
B.3.2    应选用优质化学纯液体石蜡。
B.3.3    液体石蜡易燃,在对液体石蜡保藏菌种进行操作时注意防止火灾。
B.3.4    保藏场所应保持干燥,防止棉塞污染。
B.3.5    保藏期间应定期检查,如培养基露出液面,应及时补充灭菌的液体石蜡。
B.4   方法与步骤
B.4.1   液体石蜡
将液体石蜡分装加棉塞,用牛皮纸包好,0.1MPa灭菌30分钟取出,置40℃恒温箱蒸发水分,经无菌检查后备用。
B.4.2   斜面培养物的制备
参照附录A,斜面宜短,不超过试管三分之一为宜。
B.4.3   灌注石蜡
无菌条件下将灭菌的液体石蜡注入刚培养好的斜面培养物上,液面高出斜面顶部1厘米左右,使菌体与空气隔绝。
B.4.4   保藏
将注入石蜡油的菌种斜面直立存放于低温(4℃-15℃)干燥处,保藏时间为2-10年不等。
B.4.5   恢复培养
恢复培养时,挑取少量菌体转接在适宜的新鲜培养基上,生长繁殖后,再重新转接一次。

 

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