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细菌检验工作的基本技术——肠杆菌科(上)



录入时间:2010-7-14 9:27:41 来源:互联网

肠杆菌科
 
一、常规鉴定
肠杆菌科虽然有100多个种,在临床常见的不过是其中的一部分,约20余种。从临床标本中分离的频率较高的是大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和奇异变形杆菌。对3个菌种的鉴别鉴定,实验室可用常规的方法,一般不困难。其他菌种应按规程的操作从属到种的步骤进行。
    ()与其他科属细菌的鉴别
    革兰阴性杆菌除了肠杆菌科外,还有弧菌科和非发酵菌。所以,肠杆菌科的鉴定首先应注意与这些菌的鉴别。可用形态、葡萄糖氧化或发酵、氧化酶、鞭毛等特性加以区别,见表。
表      肠杆菌科与其他科菌的区别
  试  验
肠杆菌科
弧菌科
非发酵菌
葡萄糖
F
F
0/-
氧化酶
-
+
+ *
形态
杆状
弧形
杆状
鞭毛
周毛或无
单毛
单、丛毛、周毛、无
注:*,不动杆菌、嗜麦芽黄单胞菌除外。
 
()肠杆菌科的初步分群
    可用两个试验将肠杆菌科初步分为二大类,即苯丙氨酸脱氨酶试验和葡萄糖酸盐试验(也可用V-P试验),见表:
表       肠杆菌科初步分类
菌 属 名
苯丙氨酸
葡萄糖酸盐
 
菌 属 名
苯丙氨酸
葡萄糖酸盐
变形杆菌属
+
-
 
埃希菌属
-
-
普罗威登斯菌属
+
-
 
志贺菌属
-
-
摩根菌属
+
-
 
沙门菌属
-
-
克雷伯菌属
-
+
 
枸橼酸杆菌属
-
-
肠杆菌属
- *
+ *
 
爱德华菌属
-
-
沙雷氏菌属
-
+
 
耶尔森菌属
-
-
哈夫尼亚菌属
-
+
 
 
 
 
注:·有例外。
 
()苯丙氨酸阳性菌属及种的鉴别
苯丙氨酸阳性、葡萄糖酸盐阴性的有变形杆菌属、普罗威登斯菌属、摩根菌属。
1.各属的鉴别:变形杆菌属、普罗威登斯菌属、摩根菌属的区别可用H2S、鸟氨酸、枸椽酸盐三个试验,其鉴别见表:
表                   苯丙氨酸阳性的各属鉴别
试  验
变形杆菌属
普罗威登斯菌属
摩根菌属
H2S
+
-
-
鸟氨酸
+/-
-
+
枸椽酸盐
+/-
+
-
 
    2.变形杆菌属种的鉴别:变形杆菌属常见有三个种即普通变形杆菌、奇异变形杆菌、潘尼变形杆菌。产粘液变形杆菌仅从活的或死的吉普赛蛾幼虫中发现,与人类的关系未见报道。鉴别见表。
表                      变形杆菌属内种的鉴别
试  验
普通变形杆菌
奇异变形杆菌
潘尼变形杆菌
靛基质
+
-
-
鸟氨酸
-
+
-
麦芽糖
+
-
+
 
    3.普罗威登斯菌属种的鉴别:该属临床常见有3个菌种,即产碱普罗威登斯菌、斯图普罗威登斯菌、雷极普罗威登斯菌,其鉴别见表:
    表                       普罗威登斯菌属内种的鉴别
试  验
产碱普罗威登斯菌
斯图普罗威登斯菌
雷极普罗威登斯菌
尿素
-
-/+
+
蕈糖
-
+
-
侧金盏花醇
+
-
+
 
    4.摩根菌属的鉴定:摩根菌属常见1个种,即摩根摩根菌,其鉴定见”苯丙氨酸阳性的各属鉴别表”。
 
()苯丙氨酸阴性、葡萄糖酸盐阳性各属及种鉴别
    1.葡萄糖酸盐阳性各属的鉴别:这类细菌有克雷伯菌属、肠杆菌属、沙雷菌属、哈夫尼亚菌属。可用动力、山梨醇、DNase、棉子糖等试验将其区别(见表)。
表5-3-28   葡萄糖酸盐阳性的各属的鉴别
试  验
克雷伯菌属
肠杆菌属
沙雷菌属
哈夫尼亚菌属
动力
-
+
+
+
山梨醇
+
+/-
+
-
Dnase
-
-
+
-
棉子糖
+
+
+/-
-
枸橼酸盐利用
+a
+
+
-
鸟氨酸脱羧酶
-d
+b
+c
+
注:a.鼻硬结亚种、臭鼻亚种的某些菌株阴性。
       b.聚团肠杆菌阴性。
       c.芳香沙雷菌生物2群、普城沙雷菌、深红沙雷菌阴性。
       d.解吗氨酸克雷伯菌阳性。
 
2.克雷伯菌属种的鉴别:克雷伯菌属有肺炎克雷伯菌(亚种)、臭鼻亚种、鼻硬结亚种、产酸克雷伯菌。肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌是临床中分离较多的,二者的区别在靛基质。另外,两个亚种虽然临床不多见,但已从臭鼻患者、呼吸道慢性病患者以及鼻硬结患者中分离到,因此,鉴别它们也是有一定的临床意义。可用甲基红、赖氨酸、丙二酸盐鉴别(见表5—3—29)。

表5-3-29   克雷伯菌属种的鉴别
试  验
产酸克—雷伯菌
肺炎克雷伯菌
肺炎亚种
臭鼻亚种
鼻硬结亚种
靛基质
+
-
-
-
甲基红
-
-
+
+
枸椽酸盐
+
+
-/+
-
赖氨酸
+
+
-/+
-
丙二酸盐
+
+
-
+
 
    3.肠杆菌属种的鉴别:肠杆菌属常见有 5个菌种:阴沟肠杆菌、坂崎肠杆菌、聚团肠杆菌、产气肠杆菌、格高菲肠杆菌。在其鉴别上,氨基酸脱羧酶试验的价值较大。坂崎肠杆菌、聚团肠杆菌可产生黄色素,为鉴定提供了较为明显的特征。聚团肠杆菌还有一个特点,就是赖氨酸、鸟氨酸、精氨酸皆为阴性。坂崎肠杆菌与阴沟肠杆菌的区别在于山梨醇,坂崎肠杆菌为阴性,阴沟肠杆菌为阳性。格高菲肠杆菌与产气肠杆菌也很相似,可用尿素酶和山梨醇相区别。前者尿素酶阳性,山梨醇阴性;后者尿素酶阴性,山梨醇阳性。5个种的鉴别详见表。
表5-3-30     肠杆菌属种的鉴别
试  验
阴沟肠杆菌
坂崎肠杆菌
聚团肠杆菌
产气肠杆菌
格高菲肠杆菌
赖氨酸
-
-
-
+
+
鸟氨酸
+
+
-
+
+
精氨酸
+
+
-
-
-
山梨醇
+
-
-/+
+
-
尿素酶
+/-
-
-/+
-
+
黄色素
-
+
+
-
-
 
4.沙雷菌属种与哈夫尼亚菌属种的鉴别:沙雷菌属有8个种,但临床只有粘质沙雷菌相对较多见,可用阿拉伯糖、木糖与其他沙雷菌相鉴别(见表)
表    粘质、液化沙雷菌的鉴别
试  验                                           
粘质沙雷菌
液化沙雷菌
红色沙雷菌
阿拉伯糖
-
+
+
棉子糖
-
+/-
+
木  糖
-
+
+
鸟氨酸
+
+
-
 
哈夫尼亚菌属只有1个种,即蜂房哈夫尼亚菌,其特点是不分解乳糖(偶也有分解的,约5%),发酵葡萄糖产气,动力“+”,靛基质“一”,V—P“+”,枸橼酸盐“+”,H:S“一”,赖氨酸“十”,鸟氨酸“十”,山梨醇“一”,棉子糖“一”。该菌种的生化反应在25℃比较稳定,与其他菌属的区别见前表5—3—22。
 
    ()苯丙氨酸、葡萄糖酸盐阴性的各属及种的鉴别
    1.这一类菌属有埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、枸橼酸杆菌属、爱德华菌属、耶尔森菌属。他们的区别可用H2S、动力、枸橼酸盐、靛基质、赖氨酸、尿素6个试验相鉴别(见表5—3—32)。

表5-3-32    苯丙氨酸、葡萄糖酸阴性各属的鉴别
试  验
埃希菌属
志贺菌属
沙门菌属
枸橼酸杆菌属
爱德华菌属
耶尔森菌属
H2S
-
-
+/-
+/-
+
-
动力
+
-
+
+
+
- *
枸橼酸盐
-
-
+/-
+
-
-
靛基质
+
-/+
-
-/+
+
-/+
赖氨酸
+/-
-
+
-
-
+/-
尿素
-
-
-
+/-
-
+/-
注:·30℃以下培养有动力。
2.枸橼酸杆菌属种的鉴别:该属常见有弗劳地枸橼酸杆菌、异型枸橼酸杆菌、丙二酸盐阴性枸橼酸杆菌等。三者的鉴别用靛基质、 H2S、侧金盏花醇(见表5-3-33)。
表5-3-33     枸橼酸杆菌属种的鉴别
试  验
弗劳地枸橼酸杆菌
异型枸橼酸杆菌
丙二酸盐阴性枸橼酸杆菌
H2S
+/-
-
-
靛基质
-
+
-
侧金盏花醇
-
+
-
丙二酸盐
-/+
+
-
KCN生长
+
-
+
3. 爱德华菌属,虽有3个种,但只有迟缓爱德华菌具有临床意义。其特点是不分解乳糖,分解葡萄糖产气,产生H2S,动力“+”,靛基质“+”,V-P“-”,枸橼酸盐“-”,赖氨酸“+”,鸟氨酸“+”,其他糖和醇皆“-”。与其他菌属的区别见表5—3—22。
    4.埃希菌属从临床标本中常分离的是大肠埃希菌,靛基质“+”,甲基红“+”,枸橼酸“-”,但某些菌株动力“-”,迟缓发酵或禾发酵乳糖。不产气的菌株与志贺菌属的区别见表5—3—34。出血性腹泻的大肠埃希菌,其中最常见的为Ο157:H7型,研究也较清楚。该菌种对山梨醇不分解(35℃24~48h)。最后用血清学诊断方法确定。
表5-3-34            埃希菌种与其他菌种的鉴别
试  验
蟑螂埃希菌
大肠埃希菌
大肠埃希菌(代谢不活泼菌株)
费格森埃希菌
赫尔埃希菌
创伤埃希菌
宋内志贺菌
其他志贺菌
聚团肠杆菌
迟缓爱德华菌
不脱羧莱克勒菌
靛基质
-
+
[+]
+
+
-
-
d
[-]
+
+
V-P
-
-
-
-
-
-
-
-
d
-
-
枸橼酸盐
d
-
-
[-]
-
-
-
-
d
-
-
硫化氢
-
-
-
-
-
-
-
-
-
+
-
尿素水解
-
-
-
-
-
-
-
-
[-]
-
[-]
赖氨酸
+
+
d
+
-
[+]
-
-
-
+
-
鸟氨酸
+
d
[-]
+
+
-
+
-
-
+
-
动  力
-
+
-
+
+
+
-
-
[+]
+
[+]
氰化钾生长
-
-
-
-
+
[-]
-
-
d
-
+
丙二酸盐
+
-
-
D
-
[+]
-
-
d
-
+
葡萄糖产气
+
+
-
+
+
+
-
-
[-]
+
+
侧金盏花醇
-
-
-
+
-
-
-
-
-
-
+
纤维二糖
-
-
-
+
+
+
-
-
d
-
+
乳  糖
-
+
[-]
-
d
[-]
-
-
d
-
+
甘露醇
-
+
+
+
+
+
+
+
+
-
+
蜜二糖
-
[+]
d
-
-
+
[-]
d
d
-
+
鼠李糖
+
[+]
d
+
+
+
[+]
-
[+]
-
+
山梨醇
-
+
[+]
-
-
-
-
d
d
-
-
木  糖
+
+
d
+
+
+
-
-
+
-
+
粘酸盐
d
+
d
-
+
[+]
-
-
d
-
D
醋酸盐
-
+
d
+
[+]
d
-
-
d
-
[-]
黄色色素
-
-
-
-
+
d
-
-
[+]
-
[-y]
注:-,0~10%阳性;[-],11%~25%阳性;d,26%~75%阳性;[+],76%~89%阳性; +,90%~100%阳性;[-Y],11%~25%产黄色素。
 
5.志贺菌属的鉴定:志贺菌属有4个种,临床上一般用抗血清鉴定血清群、型。在用诊断血清鉴定之前,必须确定属。有些大肠埃希菌生化特性不活泼,易与志贺菌混淆,根据表5—3—34所列的生化学特性鉴别。
4种志贺菌血清分群方法见有关产品说明。
6.沙门菌的鉴定:根据Bergey’s鉴定细菌学手册第九版(1994年)登载,沙门菌属分邦戈尔沙门菌(Salmonella bongori)和猪霍乱沙门菌(S.cho1eraesuis)。所有沙门菌属 (包括亚利桑那菌)血清型皆属上述二个种。邦戈尔沙门菌不到10个血清型,极其少见,而猪霍乱沙门菌有2 500以上血清型。
猪霍乱沙门菌再分6个亚种:亚利桑那亚种(subsp.arizonae),猪霍乱亚种(subsp.  choleraesuis),双相亚利桑那亚种(subsp.diarizonae),豪顿亚种(subsp. houtenae),印第卡亚种(subsp. indica),和萨拉姆亚种(subsp.salamae)。属于猪霍乱沙门菌猪霍乱亚种的血清型皆已被命名,而其他亚种血清型没有命名。其鉴别见表5—3—35。沙门菌的鉴定以抗血清凝集方法最方便。在凝集前必须确定属。与本菌相似的有枸橼酸杆菌和爱德华菌,可利用赖氨酸、靛基质、枸橼酸盐等试验进行区别。鉴别方法参见表5-3-32。
    表5-3-35          沙门菌种、亚种、血清型的鉴别
试    验
邦戈尔沙门菌
猪霍乱沙门菌
猪霍乱沙门菌猪霍乱亚种
亚利桑那亚种
猪霍乱亚种
双相亚利桑那亚种
豪顿亚种
印第卡亚种
萨拉姆亚种
猪霍乱血清型
鸡沙门菌血清型
副伤寒甲血清型
雏白痢血清型
伤寒血清型
枸橼酸盐
+
+
+
+
+
[+]
+
[-]
-
-
-
-
硫化氢
+
+
+
+
+
+
+
d
+
-
+
+
赖氨酸
+
+
+
+
+
+
+
+
+
-
+
+
鸟氨酸
+
+
+
+
+
+
+
+
-
+
+
-
动  力
+
+
+
+
+
+
+
+
-
+
-
+
氰化钾生长
+
-
-
-
+
-
-
-
-
-
-
-
丙二酸盐
-
+
-
+
-
-
+
-
-
-
-
-
葡萄糖产气
[+]
+
+
+
+
+
+
+
-
+
+
-
阿拉伯糖
+
+
+
+
+
+
+
-
[+]
+
+
-
卫矛醇
+
-
+
-
-
d
+
-
+
+
-
-
乳  糖
-
[-]
-
[+]
-
[-]
-
-
-
-
-
-
麦芽糖
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
-
+
密二糖
[+]
+
+
+
+
[+]
-
d
-
+
-
+
鼠李糖
+
+
+
+
+
+
+
+
-
+
+
-
山梨醇
+
+
+
+
+
-
+
[+]
-
+
[-]
+
蕈  糖
+
+
+
+
+
+
+
-
d
+
[+]
+
木  糖
+
+
+
+
+
+
+
+
d
-
[+]
[+]
粘酸盐
+
+
+
d
-
+
+
-
d
-
-
-
酒石酸盐
-
-
+
[-]
d
+
d
[+]
+
-
-
+
半乳糖苷酶
+
+
-
+
-
d
[-]
-
-
-
-
-
注:-,0~10%;[-],11%~25%阳性;d,26%~75%阳性;[+],76%~89%阳性;+,90%~100%阳性。
 
沙门菌分型血清种类较多,依血清可将沙门菌分成2500个血清型。具体做法参见有关说明。
7.耶尔森菌的鉴定:耶尔森菌属中只有小肠结肠炎耶尔森菌较为常见。该菌与其他相应的菌属鉴定要点有二:①尿素酶阳性;② 37℃动力阴性,300℃以下培养动力阳‘哇。借此可以与其他的肠杆菌科细菌相区别。小肠结肠炎耶尔森菌的其他特性见表5-3-22。

 

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