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副痘病毒属



录入时间:2009-7-13 10:00:51 来源:青岛海博

七、副痘病毒属(Parapoxvirus) 副痘病毒属包括羊接触传染性脓疱性皮炎病毒、假牛痘病毒、牛丘疹性口炎病毒、新西兰红 鹿副痘病毒,其中接触传染性脓疱性皮炎病毒是代表种。 本属病毒粒子呈卵圆形,外形独特,犹如由绳索捆绑的被卷。DNA 大小为130~150kb,G+C含量约64%,明显高于其它痘病毒。对乙醚和氯仿敏感,不耐pH3 0, 60℃加热30分钟使其灭活。干 燥痂皮内的病毒可以长期活存。副痘病毒属中所有病毒的基因组中央区域核苷酸序列有很高 的同源性,但末端序列没有同源性。副痘病毒在血清学上具有交叉反应性。 本属病毒一般不能在鸡胚绒毛尿囊膜上生长。可在绵羊或羊的组织培养细胞内增殖,并产生 细胞病变。某些成员如假牛痘病毒,可在来源于人的组织培养细胞内生长。副痘病毒不产 生血凝素。 副痘病毒主要感染偶蹄兽。人在接触病畜或污染物后也可感染。感染副痘病毒的人,在临床 、组织学和血清学上以及电镜检测的特征基本一样,很难区别是接触传染性脓胞性皮炎病毒 、假牛痘病毒,还是牛丘疹性口炎病毒。因此有人建议称这三种副痘病毒引起的人类疾病统 称为“农场痘”(farmyard pox)。但DNA杂交技术和免疫电镜的表面结构分析能够区分这 三种病毒。 黑猩猩、红松鼠、犬、猫也有感染副痘病毒的报道。 实验证实,热灭活的副痘病毒具有免疫增强剂作用。
〖BT(3+1〗 (一)羊接触传染性脓疱性皮炎病毒 (Orf virus)〖BT)〗 〖HT5K〗同义名:羊接触传染性臁疮病毒,羊口疮病毒, 羊接触传染性脓疱性口炎病毒。 〖HT5SS〗接触传染性脓疱性皮炎是主要侵害绵羊、山羊的一种接触传染性、嗜上皮性传染 病。以在口唇 、舌、鼻、乳房等部位形成丘疹、水疱、脓疱和痂皮为特征。羔羊最为敏感,另外,麝牛、 鹿 、人也可感染。对自由放牧鹿不会产生严重的损伤,仅在口腔粘膜出现增生性损害。本病 最早于1920年发现于欧洲,现已广泛分布于全世界。我国新疆、甘肃、青 海、内蒙以及东北几省的主要养羊地区均有本病发生的报道。 〖BT4〗1.形态和理化学特性 于负染标本中,病毒粒子长250~280nm,宽170~200nm,呈椭圆形的线团 样。除椭圆形颗粒外,还有锥形、砖形以及特殊的线团样球形粒子。病毒粒子表面 呈特征性的编织螺旋结构——绳索样结构相互交叉排列, 围绕病毒粒子的长轴作8字型 缠绕,但也有呈其它缠绕形式的。病毒粒子外常有囊膜包裹。 在超薄切片中,可于感染上皮细胞的胞浆内看到不同类型的病毒粒子。病毒粒子的 外层由较厚的囊膜包裹,内为圆锥形或卵圆形核心。核心的两侧为侧体。常可在感染细 胞的胞浆内发现具有双层囊膜的病毒粒子,见图31-4。 用感染牛丘疹性口炎病毒恢复期牛血清进行免疫电镜检查时仅与羊接触传染性脓疱性皮炎病 毒的外壳发生抗体反应。 病毒粒子核心中含有双链DNA。病毒DNA分子 量为888×106Da。病毒对干燥具有极高的抵抗力,干燥痂皮内的病毒 可以活存几个月乃至几年。在实验室 冰箱内保存,活力可维持15年之久。污染羊厩在将病羊移走后仍有传染性。秋季污染的 牧地,翌年春季仍能使健康羊发生感染。但痂皮内的病毒于夏季暴晒30~60天,即丧失 致病力。病毒对乙醚和氯仿敏感。可耐55℃加热30分钟,但60℃30分钟和煮沸3分钟, 均可使其灭活。
 〖BT4〗2.抗原性羊接触传染性脓疱性皮炎病毒与绵羊痘等正痘病毒没有交叉保护 力, 但耐过山羊痘的动物对接触传染性脓疱性皮炎病毒具有一定免疫力。 接触传染性脓疱性皮炎病毒与痘苗病毒具有许多同源性的蛋白质。在本病毒基因组中右末 端30kb DNA编码的10kDa多肽与痘苗病毒10kDa融合蛋白质有31%同源性;基因组中左末端1 55kb基因编码的4167kDa蛋白质(p42K)与痘苗病毒囊膜抗原p37K有42%同源性;基因组中央 的33kb BamHI片段中有3个阅读框架F2L、F3R和F4R,它们编码的蛋白质分别与痘苗病毒的 RAP94(与RNA聚合酶相关的蛋白质)、35kDa病毒囊膜抗原和拓扑异构酶有同源性,而且这两 种病毒基因组中阅读框架的排列方式极 其相似。表明它们有共同进化源。 有人用4株接触传染性脓疱性皮炎病毒与它们的抗血清进行交叉中和试验,发现4株病毒的 交叉中和反应都是单向的。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳对11株病毒多肽的结构分析表明:除了 分子量 在37 000~44 000Da区域的多肽不同外,其它区域蛋白质谱图相似,并证实不相同的多肽 是病毒粒子的表面成分和表面细管成分(surface tubules)。 由世界各地分离病毒的抗原性不尽一致,它们基因组的限制性酶切图谱也存在差异。但 同株病毒基因组的限制性酶切图谱又比较保守。各株之间可以互相产生交叉免疫保护力。 在补体结合试验和琼脂扩散试验中,本病毒与其它副痘病毒如假牛痘病毒、牛丘疹性口 炎病毒等具有明显的抗原交叉反应。与某些正痘病毒的交叉反应不明显。但用免疫印迹方法 检测时,本病毒的高免血清能识别3种痘苗病毒抗原。
 〖BT4〗3.培养 接触传染性脓疱性皮炎病毒不能在鸡胚绒毛尿囊膜上生长。但可在许多组织培养细 胞内增殖,并产生细胞病变。病毒实验室内通常应用胎羊皮肤细胞、羊和牛的睾丸细胞、 胎羊和胎牛的肾细胞以及人羊膜细胞和HeLa细胞等培养病毒。鸡胚成纤维细胞也能支持 病毒增殖:初代接种时,于接毒后1~2天出现细胞病变,但在连续传代后, 细胞病变消 失,回归羔羊也不能使其发病。羔羊和犊牛的原代睾丸细胞是对接触传染性脓疱性皮炎 病毒最敏感的细胞培养物,细胞病变比较明显,且随传代次数的增加,细胞病变的出现 时间逐渐规律,一般于接毒后48~60小时即可清楚看到细胞变圆、团聚并最后脱落(达7 0%~80%)等细胞病变。病毒滴度亦在此时最高。
 〖BT4〗4.病原性 虽然成年的绵羊和山羊也可发病,但羔羊和幼龄羊更为易感。于本病流行地区,许 多成年羊因早年感染而有一定程度的免疫力。 本病特征是在口唇、眼和鼻孔周围的皮肤上出现丘疹和水疱,并迅速变为脓疱,最 后形成痂皮或疣状病变——桑椹状痂垢。病羔或病羊因唇部病变疼痛而不愿吮乳或饮食, 因而迅速消瘦。如无并发症,一般可在4周内痊愈。 哺乳母羊经常由发病羔羊感染而发 生乳房病变。 接触传染性脓疱性皮炎的发病率30%~50%,死亡率不同, 在饲养卫生条件不良的 羊群中,羔羊的死亡率可能高达20%。在有并发症如蝇蛆病、坏死杆菌感染时, 死亡率明显增高。 人工针刺接种健羊的口腔、齿龈粘膜或皮肤划痕,均易引起感染。发病经过和临床症 状与自然病例相似。成年羊的症状较轻,接种部皮肤发生炎性浸润。 取病毒材料划痕接种于家兔唇部或肘内、股内等少毛部位,于接种后2~3天,局部 红肿发炎,并形成水疱,随后干涸而成痂皮。应用局部病变材料如上接种,可以传代。 组织学检查病变部细胞,可见细胞膨大、变性和空泡化等病理变化,但常不能看到 包涵体。相反,在感染的培养细胞内却可能出现包涵体。 人在接触病羊时,常可发生感染。病变大多发生于手、腕或脸。先是丘疹,随后变 为水疱和脓疱,周围皮肤红肿,局部疼痛,淋巴结肿大。最后结痂自愈。 曾有犊牛以及犬和猫发生自然感染和人工感染成功的报道,但未获得证实。 在自然条件下,病毒主要经皮肤或粘膜上的微小刺伤或擦伤而侵入,因接触病羊、 含病毒材料或污染的厩舍和用具等而感染。 绵羊静脉注射病毒不能在人工假性搔痕皮肤上产生损伤,说明病羊体内的病毒不太可能 经血源途径扩散。 接触传染性脓疱性皮炎病毒NZ2株和NZ7株的147kDa、16kDa蛋白质与哺乳动物的血管内皮 生长因子分别有22%~27% 和16%~23%的同源性。感染该病毒后,宿主血管内皮广泛增生,这很可能是病毒直接影响 血管内皮生长因子基因表达的结果。
 〖BT4〗5.免疫 自然感染的痊愈羊具有持久甚至终生的坚强免疫。采取病羊痂皮, 磨细后悬浮于50 %甘油盐水中,作成1%浓度。用硬刷子刷在羔羊肋腹或肘后无毛部,经7天左右,接种部 发生炎性或脓疱性病变,随后结痂,数周后痂皮脱落。这样的一次接种,可以产生一年 左右的免疫性。母羊应在产羔前几周接种。 必须指出,上述接种方法具有散布强毒的危险,因此禁用于从未发生过本病的安全 地区。 母羊在分娩前3~4周用疫苗接种,羔羊可通过初乳获得很高滴度的抗体,但常不能获得 保护力。1~4日龄羔羊进行疫苗接种后,在一月龄时可以抵抗强毒攻击。另外,病毒免疫接 种后,淋巴结增生反应总是出现在特异中和抗体产生之前。人们估计,羊接触传染性脓 疱性皮炎病的保护性免疫以细胞免疫机制为主。 应用连续通过组织培养细胞和强迫感染实验动物进行减毒的方法,至今未获得理想的弱 毒疫苗株。
 〖BT4〗6.诊断 接触传染性脓疱性皮炎传播迅速,病变特征——口周围具有增生性桑椹状痂垢,一 般诊断不难,但较易与绵羊痘混淆。两者在临床上的鉴别要点是: 接触传染性脓疱性皮 炎的病变通常局限于口唇和眼、鼻周围,病羊不显全身症状;而绵羊痘病羊体温升高, 痘疹或痘疱呈全身性分布,痘疱常呈脐状,全身反应重笃。为了确诊可进行实验检查。 (1)电子显微镜检查:可采取病料,作成乳剂,磷钨酸负染后直接作电镜观察,也可将其接 种易感的组织培养细胞后,取细胞培养物作电镜检查。 (2)病毒分离:使用胎羊皮肤,羊、犊牛睾丸细胞进行培养,可出现特异性细胞病变。在 感染细胞表面形成40~43kDa特异性病毒蛋白,用针对该蛋白质的单克隆抗体进行间接荧光 或免疫印迹检测感染细胞中的病毒时,能发生很强的免疫反应。用标记病毒基因组末端区 域的探针与分离的病毒DNA进行杂交,呈阳性反应。 (3)接种试验:将病料乳剂给健康羊唇划痕接种,经过3~5天可形成脓疱。 (4)免疫学方法检查:应用琼脂扩散试验和补体结合试验检查病变组织中的病毒抗原,也有 较高诊断价值。因可能出现非特异反应或交叉反应,故应设置阴性标本对照。 采取发病初期及恢复期血清进行补体结合反应及中和试验,如恢复期抗体效价明显增高可诊 断为本病。

 

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