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树莓组织培养技术



录入时间:2009-7-9 15:52:36 来源:青岛银河澳门官网入口

摘要以未萌发的腋芽和带芽茎段为外植体,对树莓进行了组织培养和快速繁殖研究。结果表明,未萌发的腋芽是最佳的外植体,MS 6BA1.0mg/L + NAA0.2mg/L 为最合适的增殖培养基;将产生的不定芽转到1 / 2 MS + IBA1.0mg/L 的生根培养基中生根良好,移栽存活率达80%以上。
关键词:树莓,组织培养,腋芽,茎段

树莓是近年来世界上发展最为迅速的、集营养与保健于一身的第三代新兴水果。由于现有树莓繁苗方式落后,所采用的扦插、根孽、压条等传统繁殖方法繁殖系数低、速度慢,致使苗木供应不足,成为目前发展树莓生产的主要限制因素。本试验探讨了红树莓系列品种― 澳洲红的顶芽及腋芽培养技术,旨在解决这一品种繁育难的问题。
1
材料和方法
1.1
材料
材料取自牡丹江林业科学研究所引种的澳洲红1 年生枝条。外植体的选取分为两种,一是生长旺季时枝条中部带腋芽茎段;二是早春腋芽萌动前,取枝条于室内水培,腋芽刚萌动时剥取的茎尖。
1.2
灭菌方法
取健壮树莓植株,将枝条除去叶片,在自来水下用细软毛刷轻刷表面,并吸干表面水分,剪成2 3cm 长带芽的茎段。按以下程序进行灭菌处理:将材料放人高温灭菌过的烧杯中一加入70 %的酒精,浸5 ~ 7s 一倒出酒精,用无菌水冲洗2 遍一用0.1 %的HgCl 消毒8 ~10min ,用无菌水冲洗5 遍,每次2 min 一切去材料受伤面,将带芽茎段切成长度为0.5 ~ 1.0cm 的单芽小段,或剥除芽鳞切取长度5 7mm的茎尖,接种培养。
1.3
起始培养
取消毒过的外植体茎尖和带芽茎段,分别接到起始培养基上。培养基各项指标为:MS + 6BA0.2 ~1.5mg/L,蔗糖30 g/L ,琼脂4 g/L , pH 5.6 ~ 5.8 ,培养温度25 2 ,光强1500~ 2000lx ,光周期12 ~ 14h / d。
1.4
增殖培养
当外植体萌发展叶分化成芽丛后,将丛生芽分成单株,转接到MS 附加不同激素浓度的继代培养基上进行增殖培养。增殖培养基为MS + 6BA 0.5 ~ 1.5 NAA0.05~0.2mg/L 。将各阶段的激素浓度分为3 ~ 4 个梯度,采用不完全实施的正交设计,每处理20 个外植体,5 次重复。
1.5
生根培养及炼苗
选取生长健壮的单个丛生芽接种于培养基l / 2MS + 6-BA 1.0mg/L, 2 %蔗糖上。根长至0.5 ~1 cm 时,把试管瓶移到室温条件下进行炼苗,一段时间后进行移栽。
2
结果与分析
2.1
外植体的选择对树莓组培苗的影响
采用生长旺季时枝条中部带腋芽茎段作为外植体,存在三个方面的问题。一是外植体大,消毒不完全,污染率高;二是外植体易褐变,实验表明培养基中加人0.25 %的VC 可有效抑制褐变;三是将得到的无菌小苗转人增殖培养时,玻璃化现象严重,增加琼脂浓度或降低6-BA 浓度均不能有效抑制玻璃化。而用茎尖作外植体时,由于腋芽表面被鳞片,在较长时间消毒后,内部芽体损伤较小,既保证了消毒效果,又避免了消毒对培养材料的损害。同时枝条经水培后,体内酚类物质减少,褐变现象消失。接种于起始培养基中,10d 后,腋芽基部开始有膨大,腋芽开始萌发,40天左右可形成丛生芽团,但不同的6-BA 浓度,其诱导的效果有所不同:低浓度的6-BA ,诱导的芽数量少但健壮;高浓度的6-BA ,诱导的芽数量多但较细。综合来看,6-BA 浓度1.Omg/L 时,诱导效果最好,芽较多且生长健壮。
2.2
芽诱导分化及丛芽的增殖
将起始培养中未污染的芽长至2 3 cm 时转接于增殖培养基上。20d 后,每个芽体可分化出1 11 个新芽,外源激素是诱导芽增殖的关键物质,适宜的激素组合可以使芽的增殖系数达到最高。实验结果表明,随着激素浓度的增加,增殖系数变大,但分化出的芽矮小细。综合来看培养基MS 6-BA 1.Omg/L NAA 0.2mg/L 是工厂化育苗较适宜的增殖培养基。芽长势好,且健壮。
2.3
根的诱导和试管苗炼苗移栽
单个丛生芽接种于生根培养基l / 2Ms + IBA1.0mg/L 、2 %蔗糖上,10d 后切口基部出现白色的根状突起,25d 后,形成较多的根,每株生根4 条以上,生根率为80 %以上。
移栽前5 天左右,在室内将封口膜打开1 / 3 左右,使幼苗与空气有一定接触。2 天后,移栽到驯化温室内,使幼苗完全暴露在空气中,要适当遮荫,避免高温和强光直接照射,3 天后即可移栽。移栽时将幼苗取出,小心洗去根部的培养基,去掉老叶,放人铺有湿报纸的盒子,要注意保湿。栽培基质为消毒后的黄沙,用镊子划痕后,夹住幼苗根部,插人至第一轮叶,用手小心压紧,用薄膜覆盖,保持温度在21 25 ,控制好水分和温度,移栽成活率可达80 %以上。
3
小结
3.1
培养材料的选择是树墓组培快繁的关键,试验表明茎尖是最合适的培养材料,腋芽表面的鳞片可避免长时间消毒对内部芽体的损害,同时,培养材料小,褐化现象明显减少。
3.2
掌握HgCl 消毒外植体时间是关键,消毒时间太短不能彻底灭菌,时间过长则可能杀死部分外植体,合适时间以10min 为宜。同时,消毒可分两次完成,每次5 min ,中间用无菌水清洗3 次,可减少Hgcl 对外植体的损害。
3.3
澳洲红组织培养中,MS + 6BA 1.0mg/L + NAA 0.2mg/L 是较适宜的增殖培养基,l /2MS + IBA1.0mg/L , 2 %蔗糖是较适宜的生根培养基。试管苗生根数在4 条以上,且根长1.Ocm 以上时,移栽成活率可达80 %以上。

 

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