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禽呼肠孤病毒(二)



录入时间:2009-7-3 10:19:36 来源:青岛海博

 病原性1954年,Fahey和Crawley首次从有慢性呼吸道疾病的鸡呼吸道内分离到禽呼肠孤 病毒,后来由Peter(1967)进一步证实。当时用这种被称为 Fahey Crawley 病毒,接种于易感鸡后,表现为温和性呼吸道疾病,病鸡的肝脏坏死并出现腱 和滑膜的炎症。禽呼肠孤病毒流行于鸡、火鸡、鸭、鹦鹉和其它禽类,可水平 传递亦可经卵垂直传递。已由多种疾病分离出该类病毒,包括病毒性关节炎、 腱鞘炎、矮小综合征(Stunting syndrome)、呼吸道病、肠病(Enteric disease)、吸收障碍综合征(Malabsorption syn drome )和骨质疏松征(Osteoporosis)等。患禽生长受阻,发生心包炎、心肌炎、 心包积水、肠炎、肝炎,腔上囊和胸腺萎缩,骨短粗或出现急慢性呼吸道病。 某些呼肠孤病毒株的致病作用,由于柔嫩艾美尔球虫或巨型艾美尔球虫的协同 感染而加强。鸡感染传染性法氏囊病病毒或在特殊的饲养环境下,能增高由WVV2937 株感染所致腱鞘炎的严重性。呼肠孤病毒也能加剧由其它病原引起的疾病,如 鸡贫血因子、大肠埃希氏杆菌和新城疫病毒。由于感染了呼肠孤病毒,使机体 的免疫功能降低,导致对其它传染性病因的易感性增加。此外,在临床上未感 染的鸡也常发现病毒。由禽呼肠孤病毒所致的最重要和常见的疾病是病毒性关节炎、腱鞘炎和吸收障 碍综合征。病毒性关节炎、腱鞘炎: 发生于4~7周龄肉鸡,但也可能发生于14~16周龄。主要症状为跗关节上方胫骨和腱束双侧肿大,腱 移动受限,表现不同程度的跛行。继而出现腓肠肌腱破裂。1~7日龄雏鸡可能 见到肝炎、心肌炎。发病率可达100%,但死亡率低于2%。病鸡可能在1~3 周内由急性期恢复,但也可能变为慢性。病鸡的肉眼病变主要是两腿的炎性水 肿。 足 庶 骨骨干有时因骨膜的成骨性活动增 高而增大。跗关节和胫股关节内经常含有大量的柠檬黄色至棕色血染的液体,有时呈脓性。 组织学病变发生于滑膜、腱、关节和心脏。腱鞘明显水肿,滑膜细胞肥大和增生。滑膜内有 异染细胞、淋巴细胞、浆细胞和巨噬细胞的浸润,并有网状细胞集聚。在慢性病例,腱 鞘纤维化,肉芽组织包围或取代正常腱。心脏损伤包括心肌纤维之间发生异嗜细胞性浸润, 并伴有灶状的网状细胞增生区。吸收障碍综合征: 虽然从患有吸收障碍综合征的病鸡中经常分离到不同致病力 的呼肠孤病毒,但是病因关系并不清楚。1~3周龄雏鸡吸收障碍的症状包括色 素沉着不良、羽毛异常、骨质疏松、生长不匀、粪便中有未消化的饲料及腹泻 、死亡率增加等。目前,美国、欧洲和澳大利亚均有报道。最常见的报道是前 胃的膨大,伴有出血或坏死性病变、卡他性肠炎。此外,可能有因关节炎和骨 质疏松症而产生的跛行。组织学变化包括有伴发局灶性坏死的前胃炎、心肌炎 、法氏囊萎缩、卡他性肠炎和胰腺炎。股骨生长板有横向和纵向断裂以及软骨 坏死和骨质表面的破碎。常见淋巴细胞浸润的小肠绒毛萎缩。近年来,在欧洲发现一种新病,称之为“蓝翅病”(Blue wing disease, BWD), 其特点为皮下及肌肉点状出血,胸腺、脾及法氏囊萎缩,对2%~3周龄的幼鸡致死 率可高达10%。从病鸡分离到两种致病病毒,一种为呼肠孤病毒,另一种为鸡传 染性贫血因子(CAA)。前者分离率最高的是病变的肌肉和皮肤,若单独接种易 感鸡,只有很低的致病性,但如将两者混合接种,则可成功地复制此病。
 
[BT4]5. 诊断 应结合临床症状再作病原学检查或血清学鉴定。
(1) 病原鉴定用无菌拭子采集胫股关节或胫跗关节的滑液或制备10%水肿滑液膜(腱膜)组织 悬液分离病毒,是较能确诊呼肠孤病毒感染的方法。还可由脾制备匀浆或从泄 殖腔、气管无菌棉拭子取样分离病毒。由于呼肠孤病毒感染的消化道和呼吸道 阶段时间短促,样品在使用前贮存在-20℃条件下。污染的病料需用抗生素处理 ,再经低速离心沉淀,除去较大颗粒后作接种用。鸡胚接种 优选的接种途径为5~7日龄鸡胚卵黄囊,每胚接种01~02ml可 疑病料。接种后3~5天鸡胚死亡,死胚明显出血,胚体微紫,内脏器官充、出 血。17~21天仍存活的胚略显矮小,肝、脾和心脏肿大并有坏死灶。也可接种 绒毛尿囊膜,形成痘样病斑和细胞浆包涵体,常于3~5天后死亡。尿囊腔途径 接种效果通常不好。细胞培养 2~6周龄鸡的肾原代细胞对于培养禽呼肠孤病毒优于鸡胚成纤维 细胞,亦可用鸡胚肝细胞,最好选用5%CO2的培养箱培养。由于呼肠孤病毒普遍存在于禽类的呼吸道和肠道,故从这些部位分离到呼肠孤 病毒,并不就是现症诊断的直接证据,如病毒性关节炎、腱鞘炎。诊断可通过 爪垫接种易感一日龄雏鸡,确定这些从受感染关节分离的呼肠孤病毒的相对致 病性,如果有致病性,在接种后72小时之内病毒可诱发爪垫出现明显炎症反应 。在分离病原的基础上,利用理化方法或血清学试验进一步对呼肠孤病毒分离物进 行鉴定。可采用DNA代谢抑制剂如在原代鸡肾细胞中用05μg/ml的放线菌素D、100 μg/ml 阿糖胞苷或300μg/ml 5氟2脱氧尿苷,病毒增殖不受影响,则说明为RNA 病毒。进一步用琼脂扩散和病毒中和等试验鉴定特异性病原。
[BT4](2) 血清学鉴定琼脂扩散试验 常用于检查呼肠孤病毒的群特异性抗体。抗原由磨碎未稀释 的感染绒毛尿囊膜(CAM)制备,这些CAM来自标准株卵黄囊途径接种死亡的胚 。也可应用感染鸡肾细胞培养物作为抗原。琼脂板用优质琼脂配制,琼脂含量 为12%,将其溶于001mol/L pH72的磷酸盐缓冲盐水中,内加8% NaCl和75%甘氨酸 。甘氨酸可使沉淀线更为清晰。孔径和孔间距均为3mm,中央1孔,周围6孔。将 抗原滴入于中央孔中,将待检血清滴加于周围孔内,并在第1和第4孔内滴加已 知的阳性血清,作为对照。在有关节病变的鸡体内,抗体可能长期持续存在, 但多数鸡的抗体可在4周内消失,故在普查鸡群的呼肠孤病毒感染时,应每月检 查一次。经脚掌人工感染的鸡,于接种后2~3周,血清中出现琼脂扩散抗体。 由于呼肠孤病毒在鸡群中传播迅速,因此只要检查鸡群中1%鸡的血清,即可了 解鸡群中是否有呼肠孤病毒感染的存在。中和试验 最好采用鸡肾细胞蚀斑减数试验,即在内含100个PFU(蚀斑单位 )/01ml的病毒液中分别加入1∶10~1∶5 120不同稀释的等量待检血清,混合 后置37℃水浴中感作45分钟。另以1∶10稀释的阴性血清同样混合感作,作为对 照。吸取02ml,接种于60×15mm平皿中的鸡肾单层细胞上,任其吸附25小时 后加上7~8ml的覆盖琼脂。继续孵育5%~7天,再加内含0001%中性红的覆盖琼 脂5ml。8~12小时后计数蚀斑。与对照比较,以能抑制90%蚀斑的血清稀释度 的倒数为血清滴度。通常将效价为1∶40或以上视为阳性。由于需要应用不同血 清型的几个病毒株以及不同稀释度的待检血清,这一试验的工作量较大。荧光抗体试验 直接法检测感染组织内抗原,抗原可在感染细胞、滑液膜或 鸡肾细胞的胞浆内证实。若用间接荧光抗体,方法更敏感,更适用于进行定量 分析。ELISA试验 更适合于群体呼肠孤病毒抗体水平的分析,其结果与中和试验相 一致,Slaght等首次建立的ELISA方法检查禽呼肠孤病毒抗体,使用S1133毒株 作为抗原,发现它与Reo25和WVV2939株的抗体发生反应,但同源抗体滴度最高 。目前用于检测的ELISA系统已商品化。
[BT4]6 预防和控制由于本病毒以水平和垂直方式传播,病毒广泛分布以及具有较高的抵抗力,因 此防制本病有一定难度。对鸡舍彻底清洗并采用碱溶液和05%有机碘液作彻底 消毒,这样可杜绝病毒的水平传播。健康鸡群尤应警惕防止引进带毒鸡胚或污 染病毒的疫苗。 由于一日龄雏鸡对致病性的呼肠孤病毒最易感,最早在2周龄才开始有年龄抵抗 力。通常在7日龄左右接种S1133或UMO207株弱毒苗。一日龄使用活疫苗能干扰 马立克氏病疫苗的免疫效果。灭活疫苗主要用于母鸡,以保证雏鸡体内存有保 护性母源免疫力。这种免疫力通常对同源性的血清型效果佳,因此呼肠孤病毒 灭活油乳剂苗往往是由抗原性相似的几株病毒(S1133、1733、2408和C08 )制备,也可考虑应用当地分离株病毒。

 

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