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哺乳动物呼肠孤病毒(一)



录入时间:2009-7-3 10:16:24 来源:青岛海博

哺乳动物呼肠孤病毒
1. 形态具有特征的廿面体对称的双层衣壳结构。病毒粒子的核心由核酸基因组及其密 切连接的内衣壳构成,其外还有一层外衣壳,无囊膜。完整的病毒粒子直径76nm 左右,核心的直径52nm左右,电子显微镜下很容易看到病毒粒子表面的壳粒, 外衣壳共92个壳粒,分别由五邻体和六邻体组成,其中80个为六邻体,12个为5 邻体,壳粒为长10nm、宽8nm的中空棱状结构。内衣壳呈廿面体5度对称排列。正呼肠孤病毒的外衣壳比较脆弱,易被热和胰凝乳蛋白酶(chymotrypsin)等 蛋白水解酶破坏,正是由于这种特性,一般说来,蛋白水解酶能增强病毒在肠 道中的感染性,这是由于脱去病毒外衣壳的缘故。内衣壳却很稳定,不仅对热 和胰凝乳蛋白酶处理具有较大的抵抗力,而且能耐高浓度的尿素、二甲亚砜( DMSO)和SDS的处理。呼肠孤病毒可在体外培养的敏感细胞内形成胞浆内包涵体,包涵体内具有许多 结晶状排列的病毒粒子。将提纯的病毒粒子置于蒸馏水中,可使外衣壳结构疏松,病毒粒子的直径增大 。也常见到呼肠孤病毒的空衣壳,这是病毒粒子中缺乏核酸的缘故。[HT5”SS][JZ]图191 3型呼肠孤病毒的形态特征[HT5”SS][JZ]单箭头 —— 内衣壳;双箭头 —— 外衣壳 ——自Raine[HT]
2. 理化学特性早在1962年,Gomatos等就已证明呼肠孤病毒具有双股RNA,因为感染呼肠孤病毒的L细胞的 胞浆内包涵体在DNA酶和RNA酶处理后依然保持感染性,Feulgen染色呈阴性反应,而且这种 包涵体在用吖啶橙染色时呈苹果绿色。5氟脱氧尿核苷(FUDR)和5溴脱氧尿核苷(BUDR ) 等DNA合成抑制剂,不能抑制呼肠孤病毒的增殖。但在病毒增殖的后期,吖啶橙染色可能呈 橘红色[ZW(]应用pH4.95的001%吖啶橙液进行染色,双股DNA和双股RNA病毒呈苹果绿色, 单股DNA和单股RNA病毒呈橘红色,详见本书第十四章。[ZW)],从而证明呼肠孤病毒除双股R NA外,同时还有单股RNA的存在。后者是一些低分子量的寡核苷酸,一般认为是病毒不完全 转录的产物,约占病毒核酸总量的15%%~20%。这些单股RNA主要分布在病毒粒子核心的外面 。正呼肠孤病毒的整个基因组由10个片段的双股RNA组成,节段分子量为05×103~27× 103kDa,RNA的总分子量14×103~15×103kDa。在氯化铯中的浮密度为161g/cm3 。S20W≈730。RNA含量约占病毒粒子总重的14%,病毒共含3 000个寡核苷酸,其长度 在2%~20核苷间,核心含44%RNA。G+C含量为44%。双股RNA在78~85℃温度中发生变性,成 为对RNA酶敏感的单股RNA,说明其中存在不耐热的结合键。病毒粒子分子量130×106Da,本属病毒的基因组与呼肠孤病毒科其它属成员无同源性序列 。正呼肠孤病毒的蛋白质占病毒粒子总重的86%,分布于两层衣壳内,一共有9种蛋白质,分 子量33×103~155×103Da,7种主要多肽,即λ1、λ2、μ1、μ2、δ1、 δ2、和δ3。外衣壳由μ2、δ1和δ3等三种蛋白质组成。Astell等(1972)由 感染细胞中提取“亚病毒单位”,也就是除掉外衣壳的病毒粒子,随后加入δ.3蛋白,结 果成功地在试管内组装成完整的呼肠孤病毒粒子,从而证明δ3蛋白是外衣壳的主要成分 。但在仔细研究胰凝乳蛋白酶降解外衣壳的过程中,发现与衣壳稳定性和病毒粒子感染性有 关的主要成分是μ2而不是δ3。胰凝乳蛋白酶可将δ3完全除去,但病毒粒子仍保持 高度感染性。但在将μ2降解时,病毒粒子的感染性明显下降。最后除去的是δ1,结果 遗留52nm直径的内衣壳,即核心。λ1、λ2、μ1和δ2等几种蛋白质存在于内衣壳内。正呼肠孤病毒不含糖类和脂质,对乙醚有抵抗力。正呼肠孤病毒含有转录酶、复制酶、核苷酸磷酸水解酶、帽化酶。正呼肠孤病毒对去氧胆酸盐、醚和氯仿具有很大抵抗力,能耐56℃2小时或60℃30分钟的加 热,在4℃,其传染性至少可维持2个月。在有1~2mol/L MgCl2存在的情况下,50~55℃ 加热5~15分钟,可以明显提高正呼肠孤病毒的感染力。一般认为,这是除去外衣壳或改变 外衣壳结构或性质的结果。在冰冻的病毒液中加入上述浓度的Mg和Cl离子,却使病毒明显灭活,原因不明。用胰凝乳蛋 白酶处理病毒标本,有提高其感染力的作用。这种酶可使外衣壳发生部分裂解,并不将其完 全除去。正呼肠孤病毒可被某些染料的光动力作用所破坏,包括常用于蚀斑试验的中性红。 紫外线也有破坏病毒的作用,但是已经在紫外线灭活的病毒标本内多次发现多数感染复活现 象。正呼肠孤病毒在pH22~80的广泛酸碱范围内保持稳定。在室温条件下,能耐1%H2O2 、3%福尔马林、5%来苏儿和1%石炭酸1小时。但70%乙醇在较长时间作用后使其灭活,过碘酸 盐也可迅速杀死呼肠孤病毒。
 
3.抗原性正呼肠孤病毒具有共同的群特异性抗原λ2和δ3,另外还有型特异型抗原δ1。哺乳 动物的呼肠孤病毒共有一个补体结合性抗原,应用血清中和试验和血凝抑制试验,则可将其 区分为3个不同的血清型。2型呼肠孤病毒更进一步区分为4个亚型。这些血清型与禽呼肠孤 病毒没有血清学关系。奇怪的是,哺乳动物的呼肠孤病毒竟与三叶草的伤瘤病毒具有一个共 同的抗原成分,而且这种植物病毒与哺乳动物的呼肠孤病毒具有同样的形态结构以及双股RN A构型。呼肠孤病毒的3个哺乳动物血清型都能凝集人的O型红细胞,这种红细胞凝集现象发生于4~3 7℃温度中。56℃加热使呼肠孤病毒迅速丧失血凝特性。3型呼肠孤病毒还能凝集牛的红细胞 。分离自猪的病毒株常可凝集猪的红细胞,但不能凝集豚鼠和鸡的红细胞。应用蔗糖密度梯 度技术可由病毒粒子中提取两种血凝素,其中一种与病毒的感染性有关。乙醚不能破坏呼肠 孤病毒的血凝性和感染性;氯仿能破坏其血凝性,但不破坏其感染性。呼肠孤病毒的血凝现 象可被特异抗血清所抑制,故可进行血凝抑制试验检测抗体或用已知抗体鉴定病毒。

 

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