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用灵发素(LFS )建立翅子罗汉果组织培养技术二



录入时间:2009-7-2 11:54:14 来源:青岛海博

1.2.2 接种与培养
外植体诱导:将上述单节茎段在超净工作台上用75 %乙醇消毒1 n , 0.1 %升汞消毒5 min ,无菌水洗涤6 遍,分别接人(1 )一(4 )组培养基。每组15瓶,每瓶1 个茎段。
继代增殖培养:将由(2 )组培养基诱导获得的无菌植株切除顶芽、叶片和基部,再分切成单节茎段,接人(5 )组培养基。每批10~30 瓶,每瓶5 7 个茎段。培养条件:温度29 ( 22 2 )℃ (昼/夜),光照1 500 lX , 11 h / d 。
1.2.3
观察与记录
腋芽萌发率二萌发茎段如接种茎段数x 100 % (不论污染与否,萌发即计数)。发根率同法计算,以肉眼可辨(根长)1 mm )为准。苗高只计算30d 后成苗株(高度)2.5 cm ,叶数>3 )的平均数。根系发达程度以30d 后,10 株的平均株根数和根鲜重(g )表示。
愈伤组织团块的大小,依茎段横切面以外愈伤组织的平均厚度(mm )表示。初期仅在个别皮孔露白,愈伤组织尚未连成一片,记录为“< 1 mm " ,随后以目测厚度记录。
2
结果与讨论
2.1
外植体诱导
由表1 可见,在所用诱导外植体的4 种培养基中,只有添加LFS 的(2 )组能成功地诱导茎段腋芽萌发和不定根发生,同时还能有效地延迟和控制愈伤组织形成,从而直接获得根、苗齐全的无菌植株。这和该培养基对普通罗汉果外植体诱导的结果非常相似。但是,被大家广泛用于普通罗汉果外植体腋芽诱导的(3 )、(4 )两组培养基(可获得无根苗)对翅子罗汉果却截然无效,都不能使外植体腋芽萌发(见图1 ) ,更不能生根。这说明翅子罗汉果对外源CTK 的敏感性更为专一,而且这很可能就是我们前两年工作(未用LFS)屡屡失败的原因。研究中还试用过玉米素盯、油菜素内醋BR 及毗效隆CPPU 等,均未成功(未发表)。然而,( 3 )、(4 )两组培养基使翅子罗汉果茎段形成大量愈伤组织的作用效果与其在普通罗汉果茎段上的效果却几乎没有差别。这一现象提示我们,在罗汉果属中,不同种和品种(笔者做过青皮果、红毛果等,未发表)植株的离体茎段在含有BA KT (还有zT , cPPu 等)的培养基上培养时,愈伤组织的大量形成具有普遍性,这可能是由该属植物自身的生物学特性所决定的。

2.2 继代扩繁与移栽
将上述(2 )组获得的无菌苗之单节茎段转接到( 5 )组培养基继代培养,结果25 30d , 95 %以上可获得根、苗齐全的再生植株(图2 ) ,平均增殖倍数3.7 。按常规移栽,成活率达90 %以上。

3 小结
翅子罗汉果比普通罗汉果对外源CTK 的敏感性更专一,组培难度也更大。在本研究中,曾试验过BA , KT , ZT , BR , CPPU LFS 等多种能促进植物细胞分裂和分化的CTK ,但是只有LFs 能诱导其单节茎段腋芽萌发成苗,并通过继代培养完成再生植株的快速繁殖。该成果对保护、研究和开发利用这一濒危珍稀植物种质资源具有积极意义。

 

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