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禽双RNA病毒属(一)



录入时间:2009-7-2 9:57:09 来源:青岛海博

   传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus)〖BT)〗[HT5K]同义名:传染性法氏囊炎病毒,盖姆波罗病[ZW(]盖姆波罗(Gumboro)是1957 年最早发现传染性法氏囊病的一个美国地名。[ZW)]病毒,鸡肾病变病毒。〖HT5SS〗传染性法氏囊病(IBD)是鸡的急性、高度接触传染性、杀淋巴细胞性疾病,主要发生于3~ 8周龄的幼鸡,但也曾见于3月龄以上的鸡。病鸡精神沉郁,羽毛逆立,下痢,震颤,共济失 调。发病率可达100%,死亡率为5~15%,有时高达20%以上,并发或继发感染所致的死亡率 更高。剖检见法氏囊严重水肿,并有坏死灶,内含淡黄色胶冻样渗出物,粘膜面上有时有出 血点或出血斑。病后期的法氏囊可能萎缩。鸡尸可能并不消瘦,但胸肌、腿肌上常有出血斑 的存在。肾小管和输尿管内有尿酸盐沉积,心包和肝脏表面也常出现尿酸盐。2周龄以下的 雏鸡发生感染时,大多呈亚临床感染。 由于本病侵害体液免疫中枢器官——法氏囊,导致免疫抑制,从而降低机体对其它传染病的 免疫反应性。鸡早期感染传染性法氏囊病毒后,对其它病毒和细菌的易感性增高,也能影响 免疫接种效果,据报道,能降低新城疫疫苗免疫效果40%以上,降低马立克氏病疫苗免疫效 果20%以上。本病遍布于全球养禽地区,在工业化养鸡业发达的国家尤为严重,只有新西兰例外,目前无 IBDV感染的鸡群。我国于1979年先后在北京、广州、上海等地发现本病,现已传遍全国各地 ,给养鸡业造成了很大的经济损失。〖JZ〗图20-1位置[HT5”H][JZ]图20-1〓传染性法氏囊病病毒[CD2]结晶状排列, N为细胞核[JY,4][CD2]自周蛟等[HT][BT4]1  形态本病毒无囊膜、呈廿面体立体对称。三角剖分数T=13。有单层衣壳,病毒粒子直径 约60nm,除完整病毒粒子外, 还常见有空衣壳。[BT4]2  理化学特性目前公认IBDV有4种结构多肽: Vp1、Vp2、Vp3、Vp4,分子量分别为90kDa、41kDa 、32kDa和28kDa。其中Vp2和Vp3是病毒的主要结构蛋白,在血清Ⅰ型病毒中分别占51% 和40%(Dobos等,1979),而Vp1和Vp4分别占3%和6%,是病毒的次要蛋白质。除了上述 蛋白质之外,也观察到附加体蛋白质Vpx,被认为是Vp2的前体。IBDV是双RNA病毒科中 最先测定核苷酸序列的病毒,基因组的两个节段中A片段3 300~3 400bp,主要包括一个大 的ORF,编码分子量110kDa的多聚蛋白Vp2Vp4Vp3;B片段长2 800~2 900bp,编 码Vp1。完整病毒粒子在氯化铯中浮密度为131~134g/cm3。病毒非常稳定,对乙醚和氯仿不 敏感,高度抗酸(pH2)。56℃ 5小时或60℃ 30分钟仍有活力。pH12或70℃ 30分钟条件下 病毒死亡,05%氯化铵作用10分钟能杀死病毒。
3.抗原性已知IBDV有2个血清型,可用病毒中和试验区别。Ⅰ型病毒对鸡有致病力,对火鸡无致病力 ;Ⅱ型病毒对鸡和火鸡不致病或只有很弱的致病力。两个血清型病毒抗原的相关性小于10% ,因此交叉保护力很低,体内有血清Ⅱ型病毒的抗体仍然可以受到血清Ⅰ型病毒的感染。Le e和Lukert曾提出可能存在第Ⅲ个血清型,但目前尚无足够的资料。应用 琼扩、荧光抗体和ELISA试验发现,IBDV带有共同的群抗原。两种多肽Vp2和Vp3都含有 决定群抗原的抗原决定簇,只有Vp2具有型特异的抗原。经常发生变异的部位主要在Vp2 的可变区,该区域的变化构成了抗原漂移的主要原因。已知Ⅰ型至少有6个亚型,作中和试 验时亚型之间仅有一定程度的交叉,可以通过交叉中和试验和交叉攻毒试验进行鉴定。近年来在接种标准株疫苗而免疫失败的鸡群中分离出IBDV超强毒(vvIBDV)或变异株(vari ant),鉴定出的强毒分离物可引起与炎症或水肿无关的法氏囊损害。这些抗原性和病原性 变异株的蔓延扩散,使得IBD的防制复杂化。
4.培养鸡胚接种是培养传染性法氏囊病病毒的最好手段。应选用无母源抗体的鸡胚进行病毒分离。 5~7日龄鸡胚作卵黄囊接种,9~11日龄的鸡胚则作绒毛尿囊膜(CAM)或尿囊腔接种。实践 证明绒毛尿囊膜接种途径最为敏感。将含病毒材料接种绒毛尿囊膜,鸡胚通常在感染后4~6 天死亡。感染鸡胚发育阻滞,水肿和出血。肾充、出血,肝脏可能发生斑点状坏死和出血斑 ,CAM通常没有明显损害。在早期的病毒传代中,鸡胚液中病毒含量非常低,而鸡胚(包括 内脏)和CAM中有大量病毒。在接种后4~5天,一般每g组织含毒量可达104~105EID 50,而尿囊液中含量很低。比较尿囊腔、卵黄囊和CAM三种接种途径,发现经尿囊腔接 种的病毒复制量最低,所产生的病毒滴度比CAM途径低15log10~20log10的鸡胚半数感 染量(EID50),卵黄囊途径介于两者之间。通过CAM接种鸡胚很容易分离和培养IBDV变异株,但通常不会致死鸡胚。由IBDV变异株引起 的鸡胚病变与标准株有差异,通常表现为肝脏坏死和脾肿大。在用新分离毒株接种时,鸡胚 液中很少含有病毒,当在鸡胚中连续多次传代以后,鸡胚液中的含毒量增多,但病毒同时逐 渐降低对鸡的毒力。尽管IBDV的初次分离最好用鸡胚接种,但该病毒可以适应细胞培养。大多数实验室使用鸡胚 成纤维细胞(CEF)增殖IBDV,适应于鸡胚的IBDV可在CEF上增殖,并产生细胞病变。可利用 蚀斑测定或微量滴定技术进行细胞培养物适应毒的定量分析,比鸡胚接种法更敏感。IBDV也 能在鸡胚法氏囊细胞、肾细胞中增殖,产生细胞病变和形成蚀斑。对IBDV敏感的非鸡源性细 胞包括火鸡胚细胞、鸭胚细胞、兔肾细胞(RK13)、猴肾细胞(Vero)和幼素领猴肾细胞 (BGM70)等。Jackwood等(1987)比较了三个哺乳动物细胞系MA104,Vero和BGM70 对 于IBDV血清Ⅰ型和Ⅱ型及血清Ⅰ型变异株的几个毒株的生长情况。病毒在三个细胞系内均能 生长,BGM70细胞的病变最为明显。BGM70细胞培养的中和滴度可与鸡胚成纤维细胞相比 。用鸡胚源的细胞培养物分离和连续传代野外分离的IBDV是困难的。应该考虑到,病毒在体外 系统中增殖,有产生缺陷粒子的可能性。

 

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