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泥胡菜的组织培养及高效无性系建立的研究二



录入时间:2009-6-29 15:26:37 来源:青岛海博

2 结果与分析

2.1 不同浓度生长素对愈伤组织诱导的影响 
接种后 1 5 d , 在培养嫩茎段的培养基上, 有的开始形成黄色的愈伤组织。接种5 0 d后观察统计, 由表 1可见, 在附加不同浓度I B A的培养基上, 不能诱导叶柄和嫩茎形成愈伤组织; 而在附加不同浓度2 , 4.DN A A的培养基上, 均能诱导, 但愈伤组织诱导率和长势存在一定的差异。从愈伤组织的诱导率和长势看, 附加不同浓度2 , 4 D的培养基好于附加不同浓度N A A的培养基。尤其是在附加浓度为 1.0 m g L 1.5 m L 2 , 4 - D的培养基上, 不仅诱导率达 1 0 0 %, 而且所诱导的愈伤组织为绿色的颗粒状。一般认为, 这样的愈伤组织具有分化能力。将在附加浓度为 1.0 mg L 1.5 mg L2 , 4-D的培养基上诱导的愈伤组织接种在相同的培养基上, 进行继代培养。经过 3次重复试验, 每次继代培养6代的观察都表明, 继代培养的周期缩短为 4 0 d , 每个培养周期平均每个愈伤组织颗粒能分化出2 8.6个新颗粒, 且长势基本保持不变。这说明 MS+ 6 - B A 0.3 m g L+2 , 4 D  1.01.5 m g L是诱导泥胡菜嫩茎形成颗粒状愈伤组织的理想培养基。
2.2
不同培养基对颗粒状愈伤组织分化的影响 接种后 1 5 d左右, 部分培养基可见愈伤组织颗粒开始分化。5 0 d后观察统计, 由表2可见, 在无光条件下培养的不能分化, 而在光照条件下培养的均能分化, 但以MS为基本培养基的分化率高于 1 2 MS 。尤其是在 MS+A g N 02   1.5 mg/L+6 - B A 0.4 m g L+N A A 0.1 m g L的培养基上, 不仅分化率达 1 0 0 %, 而且分化的不定芽长势好。观察统计表明, 在该培养基上培养的颗粒状愈伤组织培养到3 0 d时, 分化率已达7 9 %, 并且在已分化的不定芽基部又会分化出多个不定芽; 继续培养到5 0 d时, 平均每个愈伤组织颗粒能分化出2.1 0.5 c m以上、 长势旺盛的不定芽。把分化培养的不定芽从基部剪下,接种到相同的培养基上进行分化继代培养。经过 3次重复试验, 每次继代培养5次表明: 继代培养的周期缩短为4 0 d 。 1 次继代培养 1个不定芽可分化形成4.8个高0.6 c m以上、生长旺盛的、 呈丛生状的不定芽。上述试验结果表明: M S+ A g N O3 1.5 mg L+6.B A0.4 mg L+N A A0.1   m g L泥胡菜颗粒状愈伤组织和不定芽分化的理想培养基。
2.3
不同培养基对不定芽生根的影响 培养 1 0 d左右时观察发现, 在含有不同浓度 2 ,4 -D的培养基上, 部分插入培养基的不定芽周围能够生长出愈伤组织, 但不能诱导形成根原基 ; 而在含有不同浓度 I AA培养基上能够形成可见根原基。 

培养到2 5 d时, 接种在附加2 , 4 -D的培养基上的材料不能诱导生根 , 而在所有附加 I A A的培养基上均可生根。尤其是附加 I A A   0.6   m g L的培养基上, 不仅生根率高达 1 0 0 %, 生根数量达到7.2条/ ( 见表3 ) , 而且试管苗高5 c m左右, 长势旺盛。将该培养基上培养的试管苗在培养条件不变的情况下, 进行生根继代培养, 2 3 d可培养 1代生长非常旺盛的试管苗, 每一代的繁殖系数为 3.2; 连续培养7代, 试管苗的长势和繁殖系数保持不变。上述表明, 1 2  MS+I A A 0.6 mg L 泥胡菜试管苗生根和生根继代培养的理想培养基。 

2.4 试管苗的移栽和扦插 观察表明, 移栽后 1 4 d可见成活并开始生长; 3 0 d时生长旺盛, 平均成活率为9 5.5 %; 5 0 d 后开始旺盛生长。扦插 1 7   d时可见成活并开始生长, 平均成活率为9 1.2 ; 6 0 d 左右开始旺盛生长。扦插苗初期比移栽植株小 1 3左右, 7 0 d时外观上就基本一致。上述说 明炉灰渣是泥胡菜试管苗移栽和扦插的理想基质。 

2.5 移植试管苗的长势 移植后的定期观察表明, 移植成活率几近1 0 0 %。与野生苗相比, 移栽和扦插的泥胡菜试管苗长势粗壮 、 旺盛。翌年 4月中旬开始发芽生长, 发芽时间较野生苗早7 d左右。6、7月份开花, 8、9月结实。另外, 对移植试管苗根系的观察还表明: 根系相当发达, 相当于野生植株的 2倍左右。经过连续 3年的观察发现, 移植山坡上的泥胡菜试管苗各种性状均与野生植株一致, 并具有长势旺盛 、春天发芽早 、根系发达的性状。 

3 结论与讨论

该研究以泥胡菜嫩茎为材料,成功建立起泥胡菜高效无性系。研究结果表明, MS+ 6 - B A  0.3 m g L+ 2 , 4 D 1.01.5 mg L是诱导泥胡菜嫩茎形成颗粒状愈伤组织的理想培养基 ; MSAg NO3 1.5 mg L+6 B A  0 .4   mg L+NAA 0 .1 mg L是颗粒状愈伤组织和不定芽分化培养的理想培养基; 1 2  MS + I A A  0.6 m g L是试管苗生根和生根继代培养的理想培养基; 炉灰渣是试管苗移栽和扦插的理想基质。移植的试管苗在其他各种性状保持不变的情况下, 出现了长势旺盛、 春天发芽早、 根系发达的性状特点。 

研究还发现, 用继代培养的方法进行快速繁殖, 1 愈伤组织颗粒4 0 d能形成2 8.6个新颗粒, 1年能繁殖出2 8.6 后代; 1个不定芽4 0 d可分化形成4.8个生长旺盛的不定芽, 1 年能繁殖出4 . 8个后代; 生根试管苗2 3 d可繁殖培养 1代, 1 代的繁殖系数为 3.2 , 1年能繁殖出3.2  后代。可见不论采用哪种方法进行快速繁殖, 每年都能产生大量的试管苗, 达到建立高效无性系的目的。但是, 从长势和有效性两个方面看, 生根继代的方法虽然繁殖速度较慢, 但所培养的试管苗不仅生长旺盛, 而且几乎没有无效苗。所以, 在进行规模繁殖中, 应采用生根继代的方法。 

 

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