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合果芋组织培养快繁技术研究一



录入时间:2009-6-26 9:54:04 来源:青岛海博

摘要:以合果芋幼嫩侧芽为外植体,研究了不同激素浓度对合果芋组织培养的影响。结果表明:用0.1 %的氯化汞溶液+3 Tween20 对外植体处理35 min ,灭菌效成功率达75 % ;较好的诱导培养基为MS BA 5.0mg/L IAA 0.2mg/L ,最佳的增殖培养基为BA 2.0mg/L NAA 0.1mg/L ,最好的生根培养基为MS NAA 0.3mg/L + IAA 0.2mg/L ;生根瓶苗置于室外自然光线下练苗7d 后,移栽到珍珠岩:腐殖土:壤土=1 : 1 : l 的基质中,成活率可达94 %以上。
关键词:合果芋;组织培养;快繁;培养基
合果芋,又名箭叶芋,为天南星科多年生常绿攀缘草本植物,原产于中南美洲热带地区,全世界广泛栽培,我国南方各省种植十分普遍。它除了广泛应用于室内盆栽观赏外,还可设立成绿色支柱造型,更多用于室外半阴处作地被覆盖,是一个极具发展潜力的观叶植物。
合果芋的常规繁殖方法为扦插或分株,分株繁殖通常在秋季至冬季。但繁殖系数较低,质量较差,整齐度低,成本较高,而且受季节的影响,种苗满足不了市场的需求。为此,探索一条规模化快繁技术十分必要,有关合果芋的组织培养研究国内已有报道,但系统研究较少。试验以合果芋的侧芽为外植体,研究不同浓度BA 、NAA IAA 对不定芽诱导和生根的影响,探讨适合合果芋离体快繁的最佳激素组合,并建立组培快繁的技术体系,为合果芋新品种选育和优质种苗工厂化生产提供技术支持与储备。
1
材料和方法
1.1
供试材料
取云南省农科院花卉所内la 生无病虫害优选单株的幼嫩侧芽60 个作为外植体,品种为‘金童子’。
1.2
试验方法
1.2.1
外植体的处理与消毒将采回的外植体去除老叶部分,采集的侧芽由生物学基部至上约1cm 处以手术刀切断,此段即为需接种的外植体部分。将外植体用洗衣粉水清洗2 ~3 次,洗时用手轻轻揉搓,洗后以清水冲净。用75 %的酒精溶液外植体表面消毒1 min ,用无菌水冲洗1 遍。将外植体平均分为3 个处理,每个处理20 个芽,用0.1 %的氯化汞溶液+3 Tween20 对外植体分别按35 、30 、25 min 的时间段进行灭菌后,以无菌水冲洗2 次人超净台。然后用0.2 %氯化钠溶液2ml3 Tween20 分别对各外植体进行灭菌处理25 min ,后用无菌水冲洗2 次。将处理后的外植体分别接人MS BA 1 + IAA 0.2 普通草本花卉常用的诱导培养基中,每组20 瓶,为防止灭菌后的交叉污染,每瓶接人1 芽,7d 后观察结果,而后转人诱导培养基中。
1.2.2
诱导和增殖培养
不同诱导培养基的处理:将灭菌成功后的外植体平均分为3 组,分别接人加有① BA 10 + IAA 0.2 ,② BA5 IAA 0.2 ,③ BAI + IAA 0.2 MS 诱导培养基中,方法参照熊丽等编写的专著图。每组10 瓶,每瓶为1 次重复。每瓶接人1 芽,封口膜采用不透气膜。以培养基失水时间来决定,30d 1 个培养周期,第2 个周期取出切分后,继续用上述3 种培养基分别进行诱导,3 个周期后观察诱导出的不定芽总数及其生长情况,筛选合适的诱导培养基主成分,并在后续的培养中加以应用。不同增殖培养基的处理:配制MS 为基本培养基的3 组不同激素浓度:① BA5 NAA 0.1 、② BAZ + NAA 0.1 、③ BAI + NAA 0.1 的增殖培养基,每组10 瓶,将诱导出的丛生芽在超净工作台上切分为0.5 cm2 左右的小块,并将切分后的小块分别接人以上3 组培养基中,每瓶6 块,每瓶为1 次重复,l 个周期后观察增殖培养后产生不定芽的总数和和平均高度,计算繁殖系数,筛选最佳的增殖培养基激素浓度组合。1.2.3 生根培养增殖培养2 个周期后,从增殖出的不定芽中切出长约1.ocln 左右单株粗壮幼苗分别接入不同激素浓度:① NAA 0.1 、② NAA 0.5 、③ NAA 0.1 + IAAo.1 、④ NAA 0.3 IAAO.2 的生根培养基中,每组10 瓶,每瓶10 株,每瓶为1 次重复,1 个周期后观察生根培养效果,统计总生根苗数、开始生根的天数、生根量和生根率,筛选最佳的生根培养基激素浓度组合。
1.2.4
过渡移栽
当生根培养基数达到一定数量时,选取已长出1cm 根毛的生根苗20 瓶,要求每瓶生根苗数不低于20 株。将它们置于室外光线下闭瓶培养,7d 后取生根苗150 株,洗掉小苗根部的培养基,去掉基部发黄叶片,栽人灭过菌的基质中(设计3 组基质:① 净腐殖土;② 腐殖土十珍珠岩3 : 1 ;③ 净珍珠岩),浇透水后以薄膜覆盖,湿度控制在90 %以上,每周浇1 1 / 2MS营养液。进行室外过渡试验,每组基质过渡苗50 株,单株重复,采用相同的水肥管理方法,30d 后观察统计各处理成活率、平均株高和根长,以筛选最佳的过渡方式和基质。
1.3
培养条件
室内培养条件光照时间10 12h ,光照强度2000lx ,培养温度20~ 25 ,培养基含糖30 % ,琼脂7g/L , pH 5.8 。室外培养条件为光照时间12h ,光照强度4 000 10 000 lx ,温度12 25。

 

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