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微生物学实验室中如何分离培养基



录入时间:2008-9-2 16:12:17 来源:百度

   
   一、革兰阳性杆菌分离培养基 
1.罗-琴改良培养基 
 [用途] 
用于结核分枝杆菌培养。 
 [配法] 
磷酸二氢钾2.4g,硫酸镁0.24g,枸橼酸镁(或枸橼酸钠) 0.6g,天门冬素3.6g,甘油12ml,蒸馏水600ml,马铃薯淀粉30g,新鲜鸡卵液1L,2%孔雀绿水溶液20ml。 
先将磷酸盐、硫酸镁、枸橼酸镁、天门冬素及甘油,加热溶解于600ml蒸馏水中。再添放马铃薯粉,边放边搅,并继续置沸水中加热30min,待冷却至60℃左右时,加入鸡卵液1L及孔雀绿溶液20ml,充分混匀后,用无菌操作分装于灭菌试管,每支5~6ml,塞紧橡皮塞(最好是翻口塞),置于血清凝固器内制成斜面,经85℃1h间歇灭菌2次(或高压灭菌115℃20min),待凝固后经无菌试验,4℃冷藏备用。 
 [用法] 
取晨咳痰或其它体液标本,经消化处理和离心沉淀的浓缩液0.1ml(约2滴)滴种于培养基的斜面上,尽量摇晃,置35℃5%~10%二氧化碳温箱内培养1~4周,观察结果。凡在1周内发现生长的菌落,一般不可能是结核分枝杆菌;在2周后生长的菌落,奶油状,略呈黄色,粗糙突起,不透明,即取菌进行涂片染色镜检及鉴定。 
 [质量控制] 
用结核分枝杆菌菌株作阳性培养试验。 
 [保存] 
置4℃冰箱内2~4周有效。 
注: 
⑴ 本培养基由Lowenstein-Jenden设计的基础上改良。 
(2)本培养基pH约为6.0左右,一般无须校正。 
(3)间歇灭菌的温度不宜超过90℃。 
2.血清斜面培养基(吕氏血清斜面) 
 [用途] 
用于白喉棒状杆菌培养。 
 [配法] 
1%葡萄糖肉汤(pH 7.6)100ml,无菌动物血清(牛、羊、猪、兔) 300ml。 
将上述成分混合后,分装于试管内,每管约4~5ml。斜插在血清凝固器内(或蒸笼)加热80~85℃30min,使血清凝固成斜面,冷却后放4℃冰箱内。取出后采用间歇灭菌法,85℃灭菌30min,连续3天,经无菌试验证明无杂菌生长即可应用。

 

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