(1)抗独特型抗体疫苗: 抗独特型抗体是70年代后 期开 始逐渐发展起来的一种新型生物制剂，指的是针对抗体可变区的抗体，由于后者和诱导产生 前者抗体的抗原一样，能与前者抗体的可变区结合，因此后者可以模拟抗原表位的构象，代 替抗原作为疫苗使用。建立抗独特型抗体疫苗的理论根据是1974年Jerne提出的免疫网络 调节学说 ，该学说认为，机体在受抗原刺激后的免疫调节是通过独特型和抗独特型之间的相互反应进 行的。独特型存在于抗体分子的可变区内。在病毒感染或进行病毒免疫时，机体产生的中 和抗体叫做抗体1(Ab1)，在抗体1 Fab可 变区的抗原结合位点上具有独特的氨基酸序列，将其称为独特型(Id)，利用抗体1接种动物, 可以诱导机体产生针对该独特型的抗独特型抗体(抗体2), 抗体2可变区结合位点和始动病 毒抗原的结构构 象相同，因此可以利用抗体2代替病毒抗原，诱导机体产生抗体3，抗体3和抗体1相似，能够 中和始动病毒的毒力，从而形成保护性免疫应答。近年来发现，抗体2(Ab2)在功能上具有 异质 性，分为Ab2α、Ab2β、Ab2γ、Ab2δ等4型，其中Ab2β与Ab1的抗原结合位点相对应 ，在构 象上与始动病毒的抗原表位相同，可以作为抗独特型抗体疫苗应用，而其它型Ab2只识别Ab1 的非抗原结合部位，不能作为抗独特型抗体疫苗使用。抗独特型抗体作为疫苗，在 制备上较一般病毒疫苗复杂，需要首先制备多克隆或单克隆抗体1, 并需要进行抗体的纯化 及鉴定，因此抗独特型抗体主要适用 于那些目前尚不能培养或很难培养和产量低以及直接用病毒作疫苗具有潜在危险 性的病毒。目前针对乙型肝炎病毒、狂犬病病毒、人脊髓灰质炎病毒、鸡新城疫病毒、呼肠 孤病毒以及委内瑞拉马脑炎病毒等的抗独特型抗体 的研究较为活跃，其中针对乙型肝炎病毒表面抗原和呼肠孤病毒S1衣壳抗原的抗独特型抗体 在实验动 物上证明具有很好的保护作用。另外, 针对仙台病毒特异性T淋巴细胞受体的抗 独特型抗体 可以在小鼠引起细胞毒性T细胞应答，并能保护小鼠抵抗病毒攻击。由于用抗独特型抗体 较之于用天然的病毒抗原免疫诱导的中和抗体水平低，抗独特型抗体 在应用时, 也需要与一定的载体如钥孔帽贝血蓝蛋白或LPS进行偶联，或交联后辅以佐剂， 并采用适当的剂量进行免疫。因此, 抗独特型抗体在应用到实际之前尚需作很多工作。
(2)亚单位疫苗： 应用化学的方法从病毒粒子中分离出保护性抗原而制成的 疫苗称为亚单位疫苗，又叫化学疫苗。如采用Triton X100 、NP40或其它非离子去污剂 或 蛋白酶裂解病毒, 分离病毒的糖蛋白或衣壳蛋白,再将糖蛋白或衣壳蛋白嵌入人工制备的脂 质体或辅以佐剂后即可用于免疫动物。例如狂犬病病毒糖 蛋白通过正辛基βD吡喃葡糖苷(一种非离子去污剂)裂解下来以后，糖蛋白具有良好 的免 疫原性；将糖蛋白嵌入脂质体后免疫动物，其诱导的抗体水平大大提高，并能保护动 物 对街毒的攻击。近年来还报道了通过蛋白酶处理去除病毒核酸的口蹄疫病毒VP1亚单位疫苗 和 流感病毒的血凝素/神经氨酸酶亚单位疫苗等。在亚单位疫苗基础上，还可以将分离到的 亚 单位蛋白进行裂解，如采用溴化氰(CNBr)裂解，制备出多肽疫苗。例如，狂犬病病毒糖蛋白 经CNB r裂解后，可产生Cr1、Cr2…Cr7等7个多肽片段，其中Cr1、Cr3、Cr4可以诱导机体产生中和 抗体， 多肽疫苗是合成肽疫苗研究的前身，与合成肽一样，存在合适的构像与功能的关系问题。亚 单位疫苗 和多肽疫苗，都是病毒粒子的一部分，但不含有核酸，因此非常安全；但亚单位疫苗和多肽 疫苗的免疫原性较低，需要与佐剂合用，或偶联到适当的载体上应用。
(3)合成肽疫苗： 病毒性 抗原往往含有多种抗原成分，其主要抗原成分即保护性抗原只有1～2种，在保护性抗原分子 上又往往有多个抗原决定簇即抗原表位。其中只有1～2个主要抗原表位决定着病毒的免疫 力。 根据病毒的核苷酸序列推导的病毒蛋白的一级结构，结合单克隆抗体分析等技术，能够确定 出病毒蛋白的主要抗原表位中的氨基酸序列，利用化学的方法可以人工合成这一肽段，以该 肽段作为抗原而制成的疫苗即合成肽疫苗。目前有关合成肽疫苗研究较多的, 是口蹄疫病毒 (F MDV)VP1蛋白的第141～160和200～231位氨基酸肽段。其中用FMDV 141～160肽段和佐 剂免 疫后, 可以诱导豚鼠产生高水平的中和抗体，并能保护强毒的攻击。在牛和猪体内试验也获 得 了保护性免疫应答。最近Langeveld等发现，犬细小病毒VP2蛋白氨基末端的氨基酸序列在所有病毒之间是相同 的 。用针对该位点的单克隆抗体可在体外证实其对病毒的中和作用。因此根据该部位的氨基酸 序列合成了两条具有部分 重叠的15肽，与钥孔帽贝血蓝蛋白连接后，分别免疫犬及貂，只需一次注射150μg剂量，即 可获得满意的保护效果。狂犬病病毒及流感病毒的合成肽疫苗研究也取得了一定进展。合成肽 疫苗不含有病毒核酸，十分安全，但合成肽疫苗在应用前需要首先偶联到载体上，或和佐剂 混 在一起，其中合成肽只提供了抗原的B细胞表位, 而载体(β半乳糖苷酶、 钥孔帽贝血蓝 蛋白、卵清蛋白17 肽等)则提供了抗原的Th细胞表位, 只有当合成肽与载体偶联在一起时, 才能被Th细胞识别, 从而引起B细胞产生中和抗体。在同一载体上偶联多个合成肽，可以制备成多价苗或多联 苗。合成肽疫苗主要适用于由 连续氨基酸序列组成的抗原表位, 亦可用于摸拟由不连续氨基酸构成的抗原表位的研究。
(4)基因工程亚单位疫苗: 在从完整病毒粒子 制备具有免疫原性的亚单位疫苗时，由于抗原量的限制，制备过程复杂，成本高。采用基因 工程 的方法，人们不仅能够克隆得到编码病毒保护性抗原的基因，而且能够在体外对其进行改造 或修饰，并重新转移到异源生物宿主体内或培养细胞中，使病毒蛋白获得大量表达。用于 表 达病毒蛋白的载体，随着基因表达的宿主细胞不同而异，采用原核细胞(大肠杆菌)表达， 可选用市售的非融合型表达载体如pKK2233等、分泌型表达载体pINⅢ系统等以及融合蛋白 表达载体 pGEX系统等，它们分别含有tac(trplac)启动子、Ipp(脂蛋白基因)启动子和tac启动子等 ，亦可采用λ噬菌体的P〖WT6BZ〗L〖HT5SS〗和P〖WT6BZ〗R〖HT5SS〗启动子。在哺乳动物 细胞中进行表达时，可选用整合型表达载体如 pSV40系列、pBPV系列和pSRV系列等，亦可以利用非整合型表达载体如多角体病毒、痘苗病 毒和腺 病毒等。最早研究的兽用基因工程亚单位疫苗之一是口蹄疫病毒 VP1基因工程亚单位疫苗。 综 合自1981年以来德、英、美等几个研究组的研究报道, 表明通过大肠杆菌表达的口蹄疫病毒 VP1亚单位疫苗对猪、牛、羊等均有较好的免疫原性, 并能提供免疫保护作用。在兽疫上具有重要性的其它病毒如鸡A型副流感病毒、猫泛白细胞减少症病毒、猪 传染性胃肠炎病毒、水泡性口炎病毒以及狂犬病病毒的保护性抗原基因等，也有在大肠杆菌 中表达的报道，但是或则产量不高，或则免疫原性差，这可能与大肠杆菌不具有翻译后加工 功能 等特性有关。为了获得具有良好免疫原性的病毒保护性抗原亚单位疫苗, 并对其功能进行 深入研究， 近年来，经常采用真核生物细胞作为表达宿主。人的乙型肝炎病毒表 面抗 原是在真核细胞中研究较早的基因工程亚单位疫苗之一。在酵母细胞和小鼠成纤维细胞中(N IH3 T3)中表达的表面抗原颗粒与人血浆中的蛋白颗粒相同。单纯疱疹病毒1型(HSV1)表面糖蛋 白 在CHO细胞中亦获表达，以该重组糖蛋白免疫小鼠, 小鼠对HSV1具有抵抗作用。但是哺乳 动物培 养细胞表达水平往往较低。近年来，以杆状病毒作为载体表达异源病毒结构蛋白的研究越 来越多，杆状病毒系昆 虫病毒，这种病毒能够在宿主细胞内产生大量的蛋白晶状体——多角体蛋白，这些蛋白覆盖 并保护 着核内的病毒粒子。该蛋白的表达受多角体蛋白启动子调控。Prehaud等和Fu等分别以多角 体 病毒为载体, 在多角体蛋白启动子调控下于昆虫细胞内表达了狂犬病病毒的糖蛋白和核蛋白 。在免疫小鼠、猴及浣熊后均可保护动物抵抗狂犬病病毒的致死性攻击。通过痘苗病 毒等在细胞内表达的外源性病毒蛋白, 经提纯后对动物也具有良好的免疫原性。
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