母液和培养基的配制 
  在实验中常用的培养基，可将其中的各种成分配成10倍、100倍的母液，放入冰箱中保存，用时可按比例稀释。配制母液有2点好处：一是可减少每次配制称量药品的麻烦，二是减少极微量药品在每次称量时造成的误差。母液可以配单一化合物母液，但一般都配成以下四种不同混合母液。应注意以下几个方面：A.药品称量应准确，尤其微量元素化合物应精确到0.0001克，大量元素可精确到0.01克。B.配制母液的浓度适当，一是长时间保存后易沉淀，二是浓度大，用量少，在配制培养基时易影响精确度。C.母液贮藏不宜过长，一般几个月左右，要定期检查，如出现浑浊、沉淀及霉菌等现象，就不能使用。D.母液应放在2－4℃的冰箱中保存。
    (1)大量元素混合母液:指浓度大于0.5mmol／L的元素,即含N、P、K、Ca、Mg、S等六种盐类的 混合溶液，可配成10倍母液，用时每配1000ml取100ml母液，配时要注意以下几点：a.各化合物必须充分溶解后才能混合。b.混合时注意先后顺序，特别要将钙离子与硫酸根离子，磷酸根离子错开，以免产生硫酸钙、磷酸钙等不溶性化合物沉淀。c.混合时要慢，边搅拌边混合。
    (2)微量元素混合母液:指小于0.5mmol／L的元素即含除Fe以外的B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl等盐类的混合溶液，因含量低，一般配成100倍甚至1000倍，用时每配1000ml取10ml或1ml。配时也要注意顺次溶解后再混合，以免沉淀。
    (3)铁盐母液:铁盐必须单独配制，若同其他无机元素混合配成母液，易造成沉淀。配法是将5.57g FeSO4.7H2O水溶液缓慢加入到7.45gNa2－EDTA微沸水溶液中，并不断搅拌，最后定容到1000ml，用时每配1000ml培养基取5ml。
    （4）有机化合物母液：主要是维生素和氨基酸类物质，这些物质不能配成混合母液，一定要分别配成单独的母液，其浓度有每ml含0.1、1.0、10mg化合物，用时根据所需浓度适当取用。
    （5）植物激素：每种激素必须单独配制成母液，浓度为每ml含0.1、0.5、1.0mg激素，激素浓度的表示方法有两种，一种是ppm（或每升中mg数），另一种是mol.用时根据需要取用。由于多数激素难溶于水，它们的配法如下：
    1） IAA IBA GA3先溶与少量95%酒精，再加水定容到一定浓度。
    2） NAA可溶于热水或少量95％的酒精中，再加水定溶到一定浓度。
    3） 2，4－D不溶于水，可用1mol的NaOH溶解后，再加水定容至一定浓度。
    4） KIN和BA先溶于少量1mol的HCl中，再加水定容。
    5） 玉米素先溶于少量95％酒精中，再加水至一定浓度。
    2培养基的配置
    （1）混合培养基中的各成分。先量取大量元素母液，再依次加入微量元素母液、铁盐母液、有机成分，然后加入植物激素及其他附加成分。
    （2）溶化琼脂。称取应加的琼脂和蔗糖，将琼脂浸泡到透明后，用蒸馏水加热烧开熔化琼脂，待琼脂完全溶化后，把1加入，用pH试纸测pH值，并用0.1mol的NaOH或HCl调pH为5.6-5.8，最后加水定容至所需体积。
    （3）分装。将熬好的培养基分装于培养瓶中，分装时注意不要把培养基倒在瓶口上，以防引起污染，然后用封口膜或瓶盖封口。
    （4）灭菌。由于培养基内有丰富的营养物质，极利细菌和真菌繁殖，造成污染，影响组培的成功，一般有高温高压消毒和过滤消毒两种方法。⒈高温高压消毒:一般用消毒锅消毒，注意消毒锅不能装的过满，采用三次放气灭菌法，即0.05Mpa下放三次气，在0.1Mpa维持15-20分钟。⒉过滤消毒：一些易受高温破坏的培养基成分如IAA、IBA、ZT等，不宜用高温高压法消毒，可用过滤消毒，可过滤消毒后再加入已高温高压消毒的培养基中，过滤消毒应在无菌室或超净工件台上进行，以避免污染培养基。  
   

 

上一篇：培养基的成分及其特点

下一篇：组织培养的方法和步骤