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食品卫生微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验2——GB



录入时间:2009-1-12 16:16:19 来源:青岛银河澳门官网入口

6、操作步骤
6.1菌数测定以无菌操作将检样25g(mL),用灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液做成10(-1)——10(-5)的稀释液按GB/T4789.2测定。取各稀释液0.1mL,接种在两个选择性培养基一甘露醉卵黄多粘菌素(MYP)琼脂培养基上,用L形棒涂布于整个表面,置36℃士1℃培养12h——20h,选取适当菌落数的平板进行计数,蜡样芽胞杆菌在此培养基上的菌落为粉红色(表示不发酵甘露醇)周围有粉红色的晕(表示产生卵磷脂酶)。计数后,从中挑取五个此种菌落做证实试验,根据证实的蜡样芽胞杆菌的菌落数计算出该平板上的菌落数,然后乘其稀释倍数,即得每克(毫升)样品中所含蜡样芽胞杆菌数。例如:将0.1ml 10(-4)样品稀释液涂布于MYP平板上,其可疑菌落为25个,取五个鉴定,证实四个菌落为蜡样芽胞杆菌,则1g(mL)检样中所含蜡样芽胞杆菌数为:25*(4/5)*100000=20000006.2分离培养取检样或稀释液划线分离于选择性培养基(MYP)上,置37℃培养12h~20h,挑取可疑的蜡样芽胞杆菌菌落(见6.1)接种于肉汤和营养琼脂做成纯培养,然后做证实试验
6.3证实试验
6.3.1形态观察本菌为革兰氏阳性大杆菌,宽度在1um或1um以上,芽胞垒卵圆形,不突出菌体,多位于菌体中央或稍偏子一端.6.3.2培养特性本菌在肉汤中生长混浊,常微有菌膜或壁环,振摇易乳化;在普通琼脂平板上其菌落不透明、表面粗糙、似毛玻璃状或融蜡状,边缘不整齐。
6.3.3生化性状及生化分型
6.3.3.1生化性状本菌有动力;能产生卵磷脂酶和酩蛋白酶;过氧氢酶试验阳性;溶血;不发酵甘露醇和木糖;常能液化明胶和使硝酸盐还原。在厌氧条件下能发酵葡萄糖。
6.3.3.2生化分型根据蜡样芽胞杆菌对柠檬酸盐利用、硝酸盐还原、淀粉水解、V-P反应、明胶液化性状的试验,分成不同型别。
6.3.4与类似菌鉴别
本菌在生化性状上与苏云菌芽胞杆菌极为相似.但后者可籍细胞内产生蛋白质毒素结晶加以鉴别。其检查方法如下:取营养琼脂上纯培养物少许,加少量蒸馏水涂于玻片上,待自然千燥后用弱火焰固定,加甲醉于玻片上,半分钟后倾去甲醇,置火焰上干燥,然后滴加0.5%碱性复红液,并用酒精灯加热至微见蒸气维持1.5min,移去酒精灯,将玻片放置半分钟,倾去染液,置洁净自来水充分漂洗、晾干、镜检。在油浸镜下检查有无游离芽胞和深染的似菱形的红色结晶小体(如未形成游离穿胞,培养物应放室温再保存ld—2d后检查),如有即为苏云金芽胞杆菌,蜡样芽胞杆菌检查为阴性。   
   

 

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