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    微生物生长量的测定



    录入时间:2008-12-26 14:09:57 来源:青岛海博

                              微生物生长量的测定
        既然生长意味着原生质含量的增加,所以测定生长的方法也部直接地以此为根据,而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。
        (一)稀释平板菌落计数法
        是一种最常用的活菌汁数法。取一定体积的稀释菌液与合适的固体培养基在其凝固前均匀混合,或涂布于已凝固的固体培养基平板上.在最话条件下培养后,从平板上出现的菌落数乘上菌液的稀释度,即可计算出原菌液的含菌数。在一个9cm直径的培养皿平板上.一般以出现50~500个菌落为宜。
        这种方法在操作时,有较高的技术要求。其中最重要的是应使样品充分混匀,井让每支栘液管只能接触一个稀释度的菌液,有人认为,对原西液浓度为10的9个/mL的微生物来说,如果第一次稀释即采用10的-4级,第二次采用10的-2级,然后再吸此菌液o.2mL进行表面凃布和菌落计数,则所得的结果最为精确。其主要原因是,一般的吸管壁常因存在油脂而影响计数的精确度(有时误差竞高达15%)。这一稀释过程的示意图详见实验技术。
        (二)血球计数板法
        血球汁数板法是用来测定一定容积中的细胞总数目的常规方法。这种方法的特点是测定简便、直接.快速,但测定的对象有一定的局限性,只适合于个体较大的微生物种类,如
    酵母菌.霉菌的孢子等。此外测定结果是微生物个体的总数.其中包括死亡的个体和存活的个体.要想测定活菌的个数.还必须借助其他方法配合。
       (三)称干重
        称干重可用离心法或过滤法测定,一般干重为湿重的10%一2%。在离心法中,将待测培养液放人离心管中.用清水离心洗涤1—5次后.进行干燥。干燥温度可采用105、100℃或红外线烘干.也可在较低的温度(80℃或40℃)下进行真空干燥.然后称干重。以
    细菌为例,一个细胞一般重约10的-12~10的-13g。
        另一种方法为过滤法。丝状真菌可用滤纸过滤.而细菌则可用醋酸纤维膜等滤喷进行过滤。过滤后,细胞可用少量水洗涤。然后在40℃下真空干燥,称干重;以大肠杆菌为例,在液体培养物中,细胞的浓度可达2*10的8个/mL。100ml培养物可得10一90mg干重的
    细胞。
        这种方法较适合于丝状微生物的生长量的测定,对于细菌来说,一般在实监室或生产实践中较少使用。
        (四)比浊法
        细菌培养物在其生长过程中,由于原生质含量的增加,会引起培养物混浊度的增高.最古老的比浊法是采用MoFarland比浊管。这是用不同浓度的BaCl2与稀H2SO4配制成的10支试管,其中形成的BaSO4有10个梯度,分别代表10个相对的细菌浓度(预先用相应的细菌测定)。某一未知浓度的菌液只要在透射光下用肉眼与某一比浊管进行比较,如果两者透光度相当。即可目测出该菌液的大致浓度。
        如果要做精确测定,则可用分光光度计进行。在可见光的450~650nm波段内均可测定。为了对某一培养物内的菌体生长做定时跟踪,可采用不必取样的侧壁三角烧瓶来进行。测定时,只要把瓶内的培养液倒入侧臂管中.然后将此管插入特制的光电比色计比色座孔中.即可随时测出生长情况,而不必取用菌液。
        以上介绍了若干测定微生物的生长量或计算繁殖数的主要方法.其中,最常用的为称干
    重.测浊度用分光光度计,用计数板测总菌数以及用平板菌落计数法测活菌数等方法。必须指出的是,不管用什么方法,鄙有其优缺点和使用范围。所以,在使用前,一定要根据自己的研究对象和研究目的的不同,选用最合适的方法。
      
       

     

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