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人类免疫缺陷病毒—微生物学检查



录入时间:2008-12-10 15:31:49 来源:青岛银河澳门官网入口

   HIV感染早期呈病毒血症时,从病人血液、脑脊液和骨髓细胞中能分离到病毒,从血清中查到HIV抗原;在无症状的潜伏期内一般不能或很少从外周血中检测到HIV抗原。当病人进入 AIDS相关综合征或典型AIDS期,于外周血中均可查到病毒抗原、核酸及抗体。检测HIV感染者体液中病毒抗原和抗体的方法,操作方便,易于普及应用,其中抗体检测尤普通。但HIV P24抗原和病毒基因的测定,在HIV感染检测中的地位和重要性也日益受到重视。 
(一)抗体检测 
    抗体检测主要有酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫荧光试验(IFA)。ELISA用去污剂裂解HIV或感染细胞液提取物作抗原,IFA用感染细胞涂片作抗原进行抗体检测,由于HIV的全病毒抗原与其他反转录病毒有交叉反应,而且病毒是出芽释放,病毒包膜中可能带有细胞成分,与人血清中抗HLA也可发生交叉反应,易造成假阳性,如果发现阳性标本应重复一次。为防止假阳性,这类试验用于筛查抗HIV抗体,阳性者尚需进一步做蛋白印迹法(WB)确证。 
   WB法是用聚丙烯酰胺凝胶电泳将HIV蛋白进行分离,再经转移电泳将不同蛋白条带转移于硝酸纤维膜上,加入病人血清孵育后,用抗人球蛋白酶标抗体染色,就能测出针对不同结构蛋 白抗体,如抗gp120、gp41、P24抗体,特异性较高。 
(二)抗原检测 
    用ELISA检测P24抗原,在HIV感染早期尚未出现抗体时,血中就有该抗原存在。由于P24量太少,阳性率通常较低。现有用解离免疫复合物法或浓缩P24抗原,来提高敏感性。 
(三)核酸检测 
    用PCR法检测HIV基因,具有快速、高效、敏感和特异等优点,目前,该法已被应用于HIV感染早期诊断及艾滋病的研究中。 
(四)病毒分离 
    常用正常人外周血液分离单个核细胞,加PHA刺激并培养3—4d后,接种病人血液的单个核细胞、骨髓细胞、血浆或脑脊液,2—3d后,观察病毒生长情况。如果出现CPE,特别是发现多核巨细胞,说明有病毒增殖。采用IFA法检测培养细胞中的HIV抗原,或用生化方法检测培养液中的反转录酶活性,也可通过电镜检测HIV颗粒。   
   

 

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