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试管法凝集实验



录入时间:2008-12-2 16:21:44 来源:青岛银河澳门官网入口

  玻片法凝集实验为定性实验,方法简便快速,但有时会出现非特异性的凝集。试管法凝集实验则是鉴定细菌更为准确可靠的定量实验。常用于脑膜炎球菌、霍乱弧菌、布鲁菌、沙门菌的鉴定,试管法凝集实验也可用于血清学诊断。下面以肥达实验为例对实验步骤进行说明。 
    肥达实验是根据凝集反应的原理,用已知的伤寒沙门菌鞭毛抗原及菌体抗原、甲型副伤寒沙门菌鞭毛抗原、肖氏沙门菌鞭毛抗原与患者血清作定量凝集实验,以协助诊断肠热症。 
【材料】 
 1、伤寒沙门菌鞭毛抗原(H)、伤寒沙门菌菌体抗原(O)、甲型副伤寒沙门菌鞭毛抗原(A)、肖氏沙门菌鞭毛抗原(B)。 
2、可疑患者血清、0.9%氯化钠等。 
【操作】 
1、于试管架上放4排小试管,每排8支。 
2、稀释待检患者血清取一中试管,加0.9%氯化钠3.8ml和患者血清0.2ml,充分混匀,此时血清稀释度为1:20,吸此血清2ml分别加入每排的第1管中,每管0.5ml。此时中试管内剩余稀释血清2ml,再加入0.9%氯化钠溶液2ml,使之稀释成1:40。再加入每排的第2管中,每管0.5ml。以此类推,将中试管内剩余血清依次作倍比稀释,并依次将稀释血清加至每排第3至第7管中,则每排各管的血清稀释度依次为1:20,1;40,1:80,1:160,1:320,1:640,1:1280。每排第8管不加血清,只加0.5ml0.9%氯化钠作为对照。 
3、加入菌液:由第8管开始 向前加入诊断菌液: 
   第一排各管加入伤寒沙门菌鞭毛抗原(H)菌液0.5ml。 
   第二排各管加入伤寒沙门菌菌体抗原(O)菌液0.5ml。 
   第三排各管加入 甲型副伤寒沙门菌鞭毛抗原(A)菌液0.5ml。 
   第四排各管加入 肖氏沙门菌鞭毛抗原(B)菌液0.5ml。 
   此时各管的血清稀释度又各增加1倍,依次为1;40,1:80,1:160,1:320,1:640,1:1280,1:2560。每管总量1.0ml。 
4、振荡混匀,置3℃温箱中温育18—24h小时,取出观察并记录结果。 
【结果】观察结果时,先不要摇动试管,观察试管内上清液和管底细菌凝集的特点,然后轻摇试管使凝集物从管底升起,按液体的浊度、凝集块的大小记录凝集程度。另外观察结果时,要先看阴性对照管,阴性对照管不凝集时,方可观察实验管,否则可能系菌液自凝引起,需更换诊断菌液重新检测。 
    凝集程度以“+”多少表示。 
    + + + +:上层液澄清透明,细菌全部凝集沉于管底。 
    + + +:上层液基本透明,大部分细菌(75%)凝集沉于管底。 
    + +:上层液半透明,管底有明显(50%)凝集物。 
    +:上层液混浊,管底仅有少量凝集物。 
    一:不凝集,液体呈乳状与对照管相同。 
    效价定义:能使定量抗原呈“+ +”凝集的血清最高稀释度为该血清的凝集效价。   
   

 

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